选修1课时13多聚酶链式反应扩增DNA片段班级:__________姓名:__________设计人__________日期__________课前预习·预习案学习目标11．体验PCR常规的分子生物学实验方法。2．理解PCR的原理。3．讨论PCR的应用。自主梳理11．PCR原理：(1)概念：PCR，即________，能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝，是一种体外迅速________的技术。(2)原理。①DNA变性：在________的温度范围内，________解体，双链分开的过程。②DNA复性：当________后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链的过程。③DNA合成：DNA聚合酶从引物的________开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的________向________延伸。(3)条件2．PCR的反应过程：(1)循环次数：一般是________次。(2)过程。①变性：当温度上升到________时，双链DNA________。②复性：温度下降到________，两种引物通过________与两条单链DNA结合。③延伸：温度上升到________，溶液中的四种脱氧核苷酸在________的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。(3)结果：DNA聚合酶只能特异地复制处于________之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈________扩增。3．PCR的实验步骤：准备：按照PCR反应体系的配方将所需试剂摆放于实验桌上↓移液：用________按照配方在微量离心管中依次加入各组分↓混合：盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管的侧壁，使反应液________↓离心：将微量离心管放在离心机上，离心约10s。目的是使反应液集中在________↓反应：将离心管放入________中，设置程序进行反应4．PCR的操作提示：(1)为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的一些用具及缓冲液、蒸馏水等在使用前必须进行________。(2)PCR所用的缓冲液和酶应________，并在________下储存。(3)在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都________。所有成分都加入后，盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管的侧壁，使反应液________。5．DNA含量的测定：稀释：取2μLPCR反应液，加入98μL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释↓对照调零：以________作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零↓测定：取DNA稀释液100μL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值↓计算：DNA含量(μg/mL)=________________________预习小测11．判断正误：DNA聚合酶能延伸子链的3＇端或5＇端。2．判断正误：PCR反应始终在高于70°C的条件下进行。3．判断正误：TaqDNA聚合酶必须在每次高温变性处理后再添加。4．判断正误：PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行。5．判断正误：高压灭菌的微量移液器枪头每吸取一种试剂后不需要更换。6．判断正误：做PCR使用的微量离心管是一种薄壁玻璃管。♒♒♒♒♒♒♒知识拓展·探究案♒♒♒♒♒♒♒探究1PCR技术的基本原理及条件11．PCR技术的概念：PCR即多聚酶链式反应，是一种________迅速________________的技术。它能以极少量的DNA为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。2．PCR技术的原理：(1)DNA的热变性在________°C的温度范围内，DNA双螺旋结构解体，________分开，这个过程称为________。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。(2)子链的合成①需要________；②合成方向总是从子链的________________。3．PCR技术的条件(1)__________模板。(2)分别与模板DNA两条模板链相结合的两种__________。(3)四种脱氧核苷酸。(4)耐热DNA聚合酶，一般用__________DNA聚合酶。(5)需要一定的__________和能严格控制__________的温控设备。4．PCR扩增方向：为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(一0H)末端称为3'端，而磷酸基团的末端称为5'端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3'端延伸DNA链，即DNA的合成方向总是从子链的5'端向3'端延伸。5．PCR原理——DNA的热变性原理通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实质上是一台能够自动控制温度的仪器。6．TaqDNA聚合酶TaqDNA聚合酶是从一种水生嗜热菌Taq中分离提取的。Taq是一种嗜热细菌，能在70〜75°C环境中生长，该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中发现的。TaqDNA聚合酶的...
