人cTnI抗原性及测定标准化的研究进展VIP免费

人cTnI抗原性及测定标准化的研究进展诊断学理论与实践2005年第4卷第l期人cTnl抗原性及测定标准化的研究进展洪理泉.郑佐娅(上海第二医科大学医学检验重点实验室,上海200023)关键词:心肌型肌钙蛋白;抗原性;标准化中图分类号:R392,11:R331.31文献标识码:C文章编号:1671?2870(2005)01?0083?03上个世纪90年代起.心肌肌钙蛋白(cTn)用于临床诊断心肌损伤.由于心肌肌钙蛋白I(cTnI)~检出微小心肌损害,现已成为心肌细胞损伤敏感度和特异度最强的标志物之一,是快速诊断急性心肌梗死(AMI)和急性冠脉综合征(acutecoronarysyndromes.ACS),协助ACS危险分级和反映其预后的主要生化标志.大量临床研究表明cTnI在诊断心肌损伤时有高度的特异度及灵敏度.是诊断心肌损伤的”金标准”.cTnl的生物学特性肌钙蛋白(Tn)由TnI,TnT和TnC3个亚单位组成,其中TnI是抑制性亚单位.可抑制肌球蛋白与肌动蛋白组合,阻止肌肉收缩:TnT是与原肌球蛋白结合的亚单位;TnC是与钙离子结合的受体.TnI有3种亚型:分子量分别为24ku的cTnI,20ku的快骨骼肌(tTnI)和慢骨骼肌肌钙蛋白I(sTnI).cTnI与sTnI的氨基酸序列有40%的异源性.cTnI氨基端有31个氨基酸是sTnI所不具有的.主要区别在l,2,3位外显子.cTnI的l,2,3位外显子较长,可编码N端的47个氨基酸.而sTnI的l,2,3外显子短,只能编码N端21个氨基酸.较cTnI短26个氨基酸.5,6,7外显子在cTnI和sTnI具高度同源性.人cTnI由基因TNNI3编码,TNNI3位于19ql3.4.全长6.2kb,其编码的cTnI为209个氨基酸多肽.相对分子量为24ku.淋巴细胞增殖活性(PI)为9.87.cTnI在心肌细胞中有2种存在形式,其大部分以结构蛋白的形式存在于心房肌和心室肌细胞中.3%的cTnI游离于心肌细胞的胞质内,在心肌细胞膜完整状态下.cTnI不能透过细胞膜进入血循环.心肌损伤时.游离部分先释放入血.4～6h就能检测到cTnI的异常,并可维持5～7d,当心肌损伤时,外周血中90%以上的cTnI,仍然以cTnI—cTnC复合物形式存在.游离的cTnI较少.人cTnI基因是在心肌特异表达的,Bodor等运用cTnI特异的单抗,对不同来源的人肌肉组织冰冻切片进行免疫组化染色,同时用免疫荧光法测定组织匀浆中的cTnI水平.实验结果表明,正常胎儿和成人的骨骼肌组织及所有的多肌炎和假肥大型肌营养不良症患者的组织中都没有cTnI表达.cTn1分子的抗原性Ferrieres等【lJ曾用68条能覆盖cTnI全长序列的多肽做?综述?抗原表位识别及二级结构推断实验,l6种鼠抗人cTnI单克隆抗体至少能分别识别肽段中1个表位,说明抗cTnI单抗识别抗原表位并不依赖蛋白的3级结构,同时用抗cTnI多克隆抗体作对比试验发现cTnI大部分序列都具抗原性,且以N.端,C.端抗原性最强.用精确的2级结构推断方法显示.cTnI是包含5个螺旋的蛋白质,5个螺旋为:A42～77aa,B90～135aa,C145～l59aa,D168～176aa和El82～197aa.of螺旋间由短的无序序列隔开,N.端第1个无序序列有抗原性.其他无序序列均无抗原性.D螺旋无抗体识别表位即无抗原性.由下列抗原表位识别表(见表1)显示抗原表位主要集中在N.端:抗原表位分析及2级结构推断表明cTnI不是球蛋白.而是一种更为延伸的构象,这使分子中大部分氨基酸序列均能被免疫系统识别,即大部分序列都有抗原性.表1抗cTnl单克隆抗体识别表位单克隆抗体(实验室命名)识别序列抗原表位位置(aa)Filatov等171用游离的cTnI和Tn复合体分别去免疫小鼠.得到l6株抗游离cTnI单抗和l5株抗Tn复合体中cTnI的单抗,用重叠的,能覆盖cTnI全长序列的人丁合成l0肽.并采用斑点技术来研究抗原表位识别位点,在总共3l株单抗中.28株单抗能与人工合成的l0肽相互作用.表明其可识别线性表位.用游离的cTnI免疫小鼠得到的l6株单抗优先识别cTnI的N.端和C.端,用Tn复合体免疫小鼠得到的l5株单抗中9株识别cTnI的N一端,可见抗原表位主要集中在N.端.比较得出既能识别游离cTnI又能识别Tn复合体中cTnI的l3株单抗识别的抗原表位位置为:l6～20aa,25～29aa,25～33aa,34～37aa,4l～49aa,56～6laa,87～92aa,87～9laa,102～l09aa,l33～l39aa,l68～l75aa,l89～l95aa和l90～196aa处.血清中cTnI的N.端,C.端均易被蛋向酶水解,稳定性差.研究发现血清中cTnI的存在形式绝大部分是cTnI.TnC复合物,而游离的eTnI及eTnI.TnC.TnT复合物只有很少一?84?部分.Modana...