微生物实验室环境及无菌操作吉林省食品药品检验所2008.3.29长春25/1/12无菌技术的概念•无菌技术主要指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施，其中包括无菌环境设施、无菌实验器材以及无菌操作等。•无菌技术的应用是一个完整的操作技术。若其中的任何一个环节污染，那其他环节虽是无菌操作，也将完全失去意义。25/1/13•无菌检查、微生物限度检查实验室分无菌操作间和缓冲间。无菌操作间应具备相应的空调净化设施和环境，采用局部百级措施时，其环境应符合万级洁净度要求。无菌室内部应六面光滑、平整、无缝隙、不起灰、不落尘、耐腐蚀、易清洗、无死角，室内不得安装上、下水道。•进入无菌操作间应有人净和物净的设施。无菌操作间应根据检验品种的需要，保持对邻室的相对正压或相对负压。室内应设专用传递窗，所有实验器材消毒灭菌处理后，通过传递窗进入无菌间或在特制进口通道内灭菌处理后送入无菌间。无菌实验室的要求无菌实验室的要求25/1/14无菌实验室的要求无菌实验室的要求•无菌室内温度应控制在18-26,℃相对湿度45%-65%.•缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室与室外大气的静压差大于10Pa。25/1/15无菌实验室的要求无菌实验室的要求•·无菌操作间内禁放杂物，并定期检查室内无菌状况，发现不符合要求时应立即停止使用，彻底消毒灭菌。并应制定对地面、门窗、墙壁、设施等的定期清洁、灭菌的规程。室内仅存放最必须的检验用具，保持固定位置，不随便移动。•常规检验工作中一般应进行环境浮游菌和沉降菌的检查，无菌操作间定期进行环境监测，一般为2-3周。•应避免不同实验室间的交叉污染。25/1/16无菌实验室的要求无菌实验室的要求•无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜的消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1小时，在每次操作完毕，同样用上述消毒液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌半小时.•阳性试验应另设单独的净化工作台，不得在供试品检验用的无菌室内或净化工作台上操作。25/1/17•凡是检验中使用的器材，能灭菌处理的必须灭菌处理。如玻璃器皿、注射器、吸管、试管、培养基、稀释剂、无菌服、口罩、称量纸等，在使用前都必须经过各种适宜的方法灭菌，在适宜的储存器或较洁净的环境中保存备用。凡检验用器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理。例如：无菌室内的凳、试管架、天平、工作台、检验样品容器或包装以及工作人员的手等，这些虽无法进行灭菌，但可以消毒。无菌间使用的拖鞋也要定期消毒处理。25/1/19•无菌操作的概念：•无菌操作一般是指在无菌环境下，使用无菌制品或无菌器材进行检验或实验的过程中，能防止微生物污染与干扰的一种常规操作方法。无菌操作25/1/110无菌操作的目的：•一是保证待检物品不被环境中微生物污染，二是防止被检样品中的微生物在操作过程中污染环境或感染操作人员。25/1/111进入无菌室的准备•消毒处理无菌室•将实验所用器材和被检样品经灭菌和消毒处理后通过传递窗进入无菌室•洗手消毒首先用肥皂涂在手上揉搓10－15s肥皂虽不杀菌但有去污作用，然后用流水彻底冲洗，可有效除去手上大多数暂住菌，再用消毒液洗手，如洗必泰、苯扎溴铵、碘伏、乙醇、过氧乙酸等25/1/112进入无菌室的准备•操作人员将手部消毒后再穿无菌服。•在进入无菌室后，进一步用浸有消毒液的棉球消毒手。25/1/113检验操作过程•①在所有操作中均不应大幅度或快速动作，以免搅动空气中尘埃微粒。•②使用玻璃器皿应轻取轻放，避免破损，以防培养物扩散。•③当灭菌瓶塞或试管塞掉落在工作台上，一般不宜再用，应另换无菌塞或通过火焰处理后再用。•④稀释样品或菌液时切勿用嘴直接吸吹吸管，用过的吸管、注射器等，应及时置入消毒缸内或消毒桶内灭菌。•⑤一切操作应严格按照无菌操作规定进行，不得违反。25/1/114谢谢！
