毛细管电泳涂层柱技术的进展VIP专享VIP免费

文献综述毛细管电泳涂层柱技术的进展Ξ康经武�陆豪杰�欧庆瑜���中国科学院兰州化学物理研究所�兰州��������提�要�毛细管电泳涂层柱是解决蛋白质在毛细管壁吸附的最有效的方法∀较为系统地综述了毛细管电泳涂层柱的几种制作方法�指出了毛细管电泳涂层柱�包括毛细管电色谱柱�的发展趋势�引用文献��篇∀关键词�毛细管电泳�涂层柱�蛋白质�吸附分类号�����������前言��年代以后�毛细管电泳����分离技术得到了迅速发展�并日益受到重视∀根据���������等���的理论�蛋白质等生物大分子由于具有很小的分子扩散系数�因此在��体系中分离时就可能达到上百万的理论塔板数∀然而�由于毛细管内壁对蛋白质的吸附作用�实际的分离柱效很难达到理论预测的那样高�对于碱性蛋白质更糟�常使谱带拖尾�分离度变差�吸附严重时甚至测不出信号∀为了克服毛细管壁对蛋白质的吸附作用�人们采用各种方法����采用极端��值����∗��或�����的缓冲溶液���������采用无机和有机添加剂的方法�缓冲液中含有高浓度的中性盐���或有机添加剂如二胺类����两性电解质���等都能有效地抑制蛋白质的吸附����对毛细管内壁进行改性�这主要是指采用物理涂敷或化学键合以及交联等方法�在毛细管壁形成单分子层或交联的涂层∀通过涂层来阻止蛋白质与毛细管壁的相互作用�以达到减小蛋白质吸附的目的∀由于涂层改变了毛细管壁的状态�因而也会引起电渗流的变化∀电中性的涂层会抑制电渗流�若是带正电的高分子涂层则会使电渗流减小甚至反转∀比较而言�第三种方法最有效∀一些重要的��分离模式�如毛细管等电聚焦和区带电泳�用于分离蛋白质时�以及最近发展起来的无胶筛分在分离分析核酸时�对毛细管柱涂层都有很强的依赖性∀近年来�随着毛细管电泳涂层柱技术的不断成熟和发展�一些商品化的��涂层柱开始被越来越多的用户所接受∀本文对��涂层柱技术的发展进行了系统的综述�并对其发展前景进行了预测∀��毛细管电泳涂层柱制备的几种方法����单分子层化学键合型毛细管电泳柱在��发展初期�������������在毛细管壁表面键合一层二醇基的硅烷化试剂用以抑制毛细管壁对蛋白质的吸附作用�效果并不理想∀�����等���将麦芽糖键合于毛细管壁�在���∗�之间能有效地抑制毛细管壁对蛋白质的吸附�但使用寿命很短∀他们将Χ�缩水甘油醚基丙基三甲氧基硅氧烷二醇基键合于毛细管壁�缩水甘油基经水解后�形成二醇基型的单分子涂层�分离效果比前者要差∀�����������将五氟苯甲酰基通过�����������������键合于毛细管壁�在�����的���������的���������缓冲液条件下�对�种酸性和碱性蛋白质进行了分离�对溶菌酶的分离柱效为����≅���塔板数���但是作者采用的缓冲溶液浓度很高∀�����和����������先用十八烷基三氯硅烷对毛细管壁进行处理�然后用����等非离子表面活性剂在形成的���涂层上涂敷一层亲水性的顶层�以阻止蛋白质与毛细管壁和���涂层的相互作用∀由于在运行过程中表面活性剂会逐渐流失�因此需要在缓冲溶液中加入������的������∀该柱在���∗��之间运行时�电渗流随溶液��值的变化比较平缓�在�����时�溶菌酶的分离柱效可达���≅���塔板数���各种酸�碱性蛋白质的回收率大于���∀�����等����以Χ�缩水甘油醚基丙基三甲氧基硅氧烷作为双官能团试剂将第��卷第�期色�����谱��������������年�月��������������������������������������Ξ本文系国家自然科学基金和中科院兰州化学物理研究所所长择优基金资助项目���通讯联系人�本文收稿日期������������修回日期������������������键合于毛细管壁�起到了一定的抑制毛细管壁对蛋白质的吸附作用�但是效果并不理想∀������等����用上述方法重复键合�次�分离碱性蛋白质的效果...