专题八现代生物科技专题第十七讲基因工程和细胞工程(时间：40分钟)1．(·安徽信息交流)下图是绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程图，请据图回答下列问题。(1)②过程用到的工具有______________________________________。(2)③过程常用的具体方法是_____________________________。(3)重组质粒中除含有目的基因外还要含着________、标记基因。(4)图示过程中涉及的具体技术手段有________、________、_________。(5)该重组细胞培养至一定阶段可通过________方法，从而一次获得多个转基因猪。解析目的基因和运载体结合用到了限制酶和DNA连接酶。将目的基因导入动物细胞常用显微注射法。重组质粒中除含有目的基因外还要含有启动子、终止子和标记基因。图中涉及了转基因技术、细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植等技术手段。若想一次获得多个转基因猪，可通过胚胎分割方法实现。答案(1)DNA连接酶、限制性内切酶(不全不正确)(2)显微注射法(3)启动子和终止子(4)转基因技术细胞核移植动物细胞培养胚胎移植(写出任意3个即可)(5)胚胎分割2．(·湖北部分重点中学联考)杂交瘤技术是利用动物细胞融合和细胞培养发展起来的一项技术，请回答下列相关问题。(1)动物组织块需用________酶处理分散成单个细胞，将组织消化后的初次培养称为________培养。(2)动物细胞培养需要提供无菌、无毒环境，除对培养液和用具进行灭菌外，通常要在培养液中添加一定量的________，以防止杂菌污染；采用______________的方法防止代谢产物的积累对细胞造成危害。(3)利用杂交瘤技术制备某种单克隆抗体时，首先需向小鼠注射________，以产生相应的效应B细胞，让该细胞与骨髓瘤细胞融合，后者具有________________的特点。(4)融合后经选择培养得到的杂交瘤细胞还需进行__________和________，经多次筛选可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。答案(1)胰蛋白原代(2)抗生素定期更换培养液(3)相应的抗原既能无限增殖又能产生特异性抗体(4)克隆化培养抗体检测3．(·东城区检测)大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中，如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶。当培养基中含有IPTG和Xgal时，Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。请分析并回答问题。(1)对已获得的目的基因可利用________技术进行扩增。(2)目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中，需要DNA连接酶恢复________键。(3)将试管Ⅰ中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是________；大肠杆菌需事先用Ca2＋进行处理，目的是________________。(4)将试管Ⅱ中的菌液接种于选择培养基上培养，培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质________和生长因子，还应加入IPTG、Xgal以及氨苄青霉素，其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出________。(5)若观察到培养基上出现________色菌落，则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因，则不利于重组质粒的筛选，原因是__________________________。答案(1)PCR(2)磷酸二酯(3)进行转化使大肠杆菌细胞处于感受态(4)碳源、氮源、无机盐、水导入pUC18质粒的大肠杆菌(5)白无论大肠杆菌中是否导入重组质粒，均会呈现蓝色菌落4．(·武汉市武昌区联考)家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。(1)进行转基因操作前，需用________酶短时间处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的________和________之间；若要检测干扰素基因在家蚕细胞中是否表达，可以采用的方法是______________。(3)通过PCR技术可大量获取目的基因。PCR反应体系主要包括：扩增缓冲液(含Mg2＋)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、________________和与干扰素基因特异性配对的DNA引物。(4)培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以________________...
