★生物技术与生物技术药物的概念生物技术药物的分类♦按用途分类:治疗药物、预防药物、作为诊断药物（免疫诊断试剂、酶诊断试剂、器官功能诊断药物、放射性核素诊断药物、诊断用单克隆抗体（McAb）、诊断用DNA芯片）♦按作用类型分类：细胞因子类药物、激素类药物、酶与辅酶类药物、疫苗、单克隆抗体药物、反义核酸药物、RNA干扰（RNAi）药物、基因治疗药物♦按生化特性分类：多肽类药物、堂白质类药物、核酸类药物、聚乙二醇（PEG）化多肽或蛋白质药物＞理化性质特性:相对分子量大、结构复杂、稳定性差＞药理学作用特性：活性与作用机制明确、作用针对性强、毒性低、体内半衰期短、有种属特异性、可产生免疫原性＞生产制备特性:药物分子在原料中的含量低、原料液中长存在降解目标产物的杂质、制备工艺条件温和、分离纯化困难、产品易受有害物质污染♦质■控制特性：质量标准内容的特殊性、制造项下的特殊规定、检定项下的特殊规定（原液、半成品及成品检定等等）弟二章基因工程制药證白类药物的特点：结构确证不完全性、具有种，属待异性、多功能性、免疫原性|临床前安全性评价的特殊性：蛋白类药物安全性担忧的性质和来源；受试物的纯度；相关动物的选择；给药剂量的选择；免疫原性；遗传毒性和致癌性（一般不进行常规的遗传毒性实验）；药代动力学真核细胞表达制品的安全性问题:生产细胞DNA残留的影响、生产用血清的影响基因工程药物稳定性研究的相关问题：药物浓度、温度、湿度和水分、氧、光照、PH基因工程药物的缺陷：生物利用度低，半衰期短；异体蛋白具有免疫原性基因工程菌的修饰改造方法:构建突变体、构建融合蛋白、PEG修饰（降低免疫原性、增加水溶性、延长»）基因工程制药基本环节♦上游阶段：制备目的基因-构建重组质粒-构建工程细胞♦下游阶段：培养工程细胞-分离纯化产物-除菌-半成品、成品检定-包装基本工具:目的基因、各种酶（切割酶、连接酶、修饰酶等）、载体、宿主细胞＞酶切结果：5*粘性末端、3,粘性末端、平头末端＞1U核酸内切爾的酶活性:指在最佳反应条件下反应1小时，完全水解1mg标准DNA所需的酶量＞影响限制性内切酶反应的因素：♦DNA样品的纯度：♦DNA的甲基化程度:核酸限制性内切酶不能够切割甲基化的核昔酸序列。在基因克隆中要使用甲基化酶缺陷型细菌菌株制备质粒DNAo♦酶切反应的温度♦DNA的分子结构♦反应缓冲液组成♦反应时间、反应体积等＞工具酶♦核酸限制性内切醯：识别、水解外源的双链DNA分子上特定的核昔酸序列。主要存在于原核微生物中.•同裂酶：指来源不同，识别序列相同的酶;进行同样的切割，产生相同的末端•同尾酶：来源不同，识别序列不同，但产生相同的粘性末端DNA甲基化酶:具有宿主专一性，对宿主自身DNA±特定核苜酸进行甲基化修饰，避免披自夕頌制徨內切酶水解♦DNA连接醯・T4噬菌体连接酶：连接双链DNA切口,或带粘性末端或平头末端的DNA片段・大肠杆菌DNA连接酶：连接双链DNA切口，或带粘性末端的DNA片，不能连接带平头末端的DNA片段♦聚合酹：以DNA或RNA为模板，将核昔酸连续加至3,—OH末端，合成方向为5'->35。DNA聚合酶、RNA聚合酶•大肠杆菌DNA聚合酶I:5'->3'DNA聚合酶活性；5J3QNA外切酶活性；3,->5JDNA外切酶活性;RNAH酶活性•Klenow酶：不具备5'—3'DNA外切酶活性•T4噬菌体DNA聚合酶:不具备5J3'DNA外切酶活性。外切酶活性比Klenow酶强200倍，对单链DNA作用强于双链DNA•T7噬菌体DNA聚合酶:不具备5，f3QNA外切酶活性・TaqDNA聚合酶・反转录酶：催化以RNA或DNA为模板，合成DNA；具有RNAH酶的活性•末端脱氧核苜酸转移酶：催化dNTP沿3,聚合,逐个加于线性DNA分子的3,末端;不需要模板載体：(vector)来源于质粒、噬菌体或病毒的DNA分子，可供插入或克隆目的基因或DNA,并具有运载外源DNA导入宿主细胞的能力.♦质粒箴体：共价闭合环状DNA(CCCDNA);开环DNA(ocDNA)；线状DNA(IDNA)・质粒的三个重要性质:遗传传递的能力；遗传交换的能力;不相容性・用于克隆的质粒的三个要素:复制子、选择标记、多克隆位点•常用质粒载体：克隆载体、表达载体、突变载体、报告载体♦Aitt菌体栽体:插入型载体、萱换载体•来源于噬菌体DNA,因可以插...
