实习报告学院:动物医学院课程:兽医传染病学实习班级:动医10*班学号:171102**姓名:**指导教师:王先炜职称:副教授实习时间2013年5月26日至2013年5月31日实习地点逸夫楼40172013年6月南京农业大学教务处制1实习报告一、实习目的1.以副猪嗜血杆菌病和蓝耳病为模型，学习传染病的临床诊断技术；2.通过对感染猪体内病毒和细菌的分离鉴定，学习掌握细菌性猪病、病毒性猪病的实验室诊断方法。3.掌握畜禽传染病的临床诊断技术。4.掌握畜禽传染病实验室诊断方案的设计、诊断试剂的准备和检测结果分析判定。5.掌握畜禽细菌与病毒混合感染的病原分离与鉴定技术。6.掌握细菌药敏试验指导畜禽临床用药。二、实习安排时间地点内容星期一5月26日白天逸夫楼4017诊断试剂的配制；器皿的准备以及灭菌的处理星期二5月27日白天逸夫楼4017病料的采取与处理；细菌的涂片检查与分离培养星期三5月28日白天逸夫楼4017病毒的分离接种（病料过滤和接种细胞）；分离细菌镜检和增殖星期四5月29日晚上逸夫楼4017细菌的生化试验、药敏试验和细菌鉴定；观察接种细胞星期五5月30日江浦农场参观学习星期六5月31日下午逸夫楼4017病毒细胞病变观察、菌落鉴定三、实习内容日期：2014.5.26星期：星期一白天王先炜老师讲解本周传染病学实习的主要内容和实习目的，包括传染病临床诊断的主要方法及及操作，实习过程中的注意事项，将48名同学分为12小组，本组为第12组。分组进行实验器材的领取和准备。准备实验器材，配制试剂采集病畜病料2检测细菌检测病毒平板划线分离、肉汤接种病料匀浆反复冻融纯培养药敏实验生化试验细胞接种细胞病变观察病毒的初步鉴定实验准备（一）灭菌消毒用品：手术刀片、手术刀柄、剪刀、大镊子、小镊子、剪刀、黄色枪头一盒、用锡箔纸包好小滤器、玻璃匀浆器、1.5mL离心管、PCR管。（二）其他用品：解剖盘、酒精灯、酒精棉球、解剖刀、记号笔、注射器、染色缸、乳胶手套、接种环、载玻片、细菌涂布棒、倒置显微镜等。（三）试剂及配制1.TSA平板（6块以上）成分：TSA：8g琼脂粉：0.08g去离子水200mL121℃，15-20min，冷却至50℃左右，加入5mL的小牛血清，2.5mLNAD2.TSB液体培养基（10管）成分：TSB：1.8g去离子水：50ml混匀后可分装小试管内（每管3mL）121℃，15-20min用之前每只试管加1μL血清，1μLNAD血清：用前要灭能（56℃，40min）3.生理盐水：0.45gNaCI加入50mL去离子水，然后高压灭菌4.细胞维持液：在50ml的DMEM液中加入1ml的血清和1ml的双抗（青、链霉素）(研究生配制）；5.TE缓冲液（一起配置）：10*TEbuffer(100ml)1MTris-HClbuffer（PH=8）10ml500mMEDTA(PH=8)2ml定容至100ml，高压保存1MTris-HCl（PH=8）（100ml）12.11gTris至80ml去离子水，加4.2ml浓HCl，定容至100ml，高压灭菌500mMEDTA（PH=8）18.61gNa2EDTA•H2O至80ml去离子水，加2gNaOH，定容至100ml（四）倒TSA平板将TSA溶液高压后冷却至60℃左右，加入小牛血清和NAD。然后将平板边沿用酒精灯外焰灼烧消毒，将TSA溶液倒入平板中，均匀铺满整个平板，待其冷却凝固后，标记好班级，组名和时间等备用。日期：2014.5.27星期：星期二细菌学检查和病毒学检查病料取样。1．细菌的分离培养：取病猪肺脏（冰冻组织需充分解冻），用酒精棉球点燃消毒肺脏表面，无菌手术刀切口，将接种环伸入于肺脏肺泡内，无菌划线接种TSA平板。具体操作如下：3a)右手执笔式持接种环，在酒精灯火焰上灼烧接种环，待冷；b)左手抓紧琼脂培养基平皿，用手掌将平皿的底固定，用手指将平皿的盖略抬起一些，进行接种。或者，将平皿盖放在试验台上，尽量直立平皿靠近酒精灯火焰；c)右手接种环在琼脂的一端涂布，划线时，接种环与琼脂表面是30°-40°的角度轻轻接触，利用腕力动作，切忌划破琼脂表面；d)接种完毕，盖好平皿盖，在平皿底玻璃上用记号笔注明接种时间，接种者等，然后将平皿的底朝上，放置在37°温箱内培养24-48小时（培养后可出现多种菌落，注意区分不同培养时间点不同类型菌类形态）。2．组织触片和染色观察：a)触片：取一小块肺脏组织，在洁净的载玻片上轻轻地作2～3个压迹，制成触片；b)干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地...
