淋巴细胞亚群检测方案VIP专享VIP免费

1写在课前的话在这一节课中针对淋巴细胞亚群检测做了一个方案性的设计。这个方案是结合国际的CLSI以及国内的检测现状而设置的。它只是针对淋巴细胞亚群，更具有针对性和特异性。目前临床上用流式细胞仪，主要的检测项目就是淋巴细胞亚群，在临床检测中应用比较广泛，技术较成熟，所以，更需要对它进行一个规范。淋巴细胞是白细胞中非常重要的一类。在正常情况下，各群淋巴细胞的数目和相对比例都在一定的范围内。那么临床常见的淋巴细胞亚群包括哪些项目？一、淋巴细胞亚群二、抗体组合方案最常见的淋巴细胞亚群包括T细胞、B细胞、NK细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞。这5个项目具有明确的临床意义，临床应用也很广泛。对于淋巴细胞亚群检测不能通过单一的抗体来检测，必须通过抗体组合来进行检测。比较倡导的方案有以下几种：联合CD45的四色方案、联合CD45三色方案、双色方案、7-氨基放线菌素D（7-AAD），必要时采用7-AAD联合CD45方案。其中联合CD45四色方案在国内的一些大型医院已经开始应用，而且在国际上是一个比较推荐的首选方案。这是因为CD45能标记白细胞，可以去除红细胞，以及其他碎片的干扰。通过45标记后再分析45标记后的淋巴细胞表达，如果不存在CD45，有可能有细胞碎片，无法排除对淋巴细胞的干扰，所以联合CD45，无论是四色还是三色方案都是一个比较倡导的方案。（一）联合CD45的四色方案联合CD45的四色方案可以有两种组合抗体的选择。第一种是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色标记，主要可以检测T3细胞、T4细胞、T8细胞这三种不同的亚群。另外，可以用CD45/CD3/CD19/CD16和（或）CD56做第二管的标记，用于检测T3细胞、B细胞和NK细胞。一般四色方案需有两种抗体检测，目前已经有比较稳定的商品化的试剂，推荐有条件的实验室推荐使用。（二）联合CD45的三色方案2联合CD45的三色方案主要是有四种不同的试剂。1.CD45/CD3/CD4这个抗体组合主要用来检测T3细胞和T4细胞。2.CD45/CD3/CD8用来检测T3细胞和T8细胞。3.CD45/CD3/CD19用来检测T3细胞和B细胞。4.CD45/CD3/CD16和/或CD56用来检测T3细胞和NK细胞。（三）双色方案如果实验室在边远的地区，条件不足，只能做双色方案，但是在双色方案中建议要把CD3加进来，因为CD45能很好地将白细胞和其他的干扰细胞，尤其是红细胞进行区分。如果不能用CD45，最好能用到CD3，CD3可以特异的标记T淋巴细胞，T淋巴细胞和CD4做双标可以克服单一的CD4抗体。为此，双色方案中也分为四管，每管当中建议都包含有CD3。1.CD3/CD4用来检测T3细胞和T4细胞。2.CD3/CD8用来检测T3细胞和T8细胞。3.CD3/CD19用来检测T3细胞和B细胞。4.CD3/CD16和/或CD56用来检测T3细胞和NK细胞。尽管检测条件不允许做四色或三色的分析，但也至少要用CD3和其他的直标抗体进行双免疫荧光染色方案，不建议采用单色方案进行淋巴细胞亚群分析。（四）7-氨基放线菌素D(7-AAD)联合CD45方案1．目的对于超过24小时的标本或肉眼观察发现已经变质的标本，需使用7-氨基放线菌素D（7-AAD）结合CD45（评估淋巴细胞、单核细胞和粒细胞死亡）复染评估细胞活力。2.判定7-AAD荧光染料主要染活细胞，主要用来鉴定细胞活性。（1）7-AAD阴性者是活细胞群。三、数据采集和分析3（2）7-AAD阳性者为细胞膜不完整的死细胞群。（3）7-AAD阴性细胞群阴性细胞群计数为75%时为最低细胞活力。（4）对于细胞活力低于75%的标本，建议采用7-AAD结合CD45的方案，包括①～③的组合方案。（一）联合CD45和SSC设门确定淋巴细胞群方案1和方案2都存在CD45，首先建议采用联合CD45和侧向散射光SSC设门来确定淋巴细胞群。它是准确分析淋巴细胞亚群的第一步，可以用于来定位淋巴细胞群，把淋巴细胞群找到，排除标本中非淋巴细胞或细胞碎片的干扰。首先在CD45/SSC散点图中，调整SSC，使所有白细胞群均可见。第二步是根据CD45强阳性细胞群设门或者划定区域。因为在CD45染色细胞中，淋巴细胞群呈现CD45强阳性和SSC弱表达。设门时尽可能包括所有淋巴细胞，仪器会给一个提示，一共是包括了多少淋巴细胞数。一般门内淋巴细胞数不低于95%，而且要排除单核细胞和嗜碱细胞的感染，因为单核和嗜碱在周围，很容易对淋巴细胞进行干扰。单核细...