外源性DNA残留量测定法（荧光定量PCR法）原则操作规程文献编码：XXXXXX目录1.目的......................................................................................................................................12.范畴......................................................................................................................................13.职责......................................................................................................................................14.根据......................................................................................................................................15.定义......................................................................................................................................16.内容......................................................................................................................................16.1.原理...........................................................................................................................16.2.实验材料...................................................................................................................26.3.操作环节...................................................................................................................36.4.成果计算...................................................................................................................66.5.鉴定原则...................................................................................................................76.6.注意事项...................................................................................................................77.有关文献..............................................................................................................................78.附件......................................................................................................................................79.变更历史..............................................................................................................................71.目的1.1.规范外源性DNA残留量测定法（荧光定量PCR法）的操作过程。2.范畴2.1.本规程合用于采用荧光定量PCR法对CHO细胞体现产品进行外源性DNA残留量的测定。3.职责3.1.办法学研究员负责严格执行本规程规定；3.2.质量研究室负责人负责本规程的培训并监督本规程的执行。4.根据4.1.DNA残留量检测样品解决试剂盒（PrepSEQTMResidualDNASamplePreparationkit，AppliedBiosysterms）使用阐明书。5.定义5.1.LTR：longtandemrepeat，长串联重复序列5.2.PCR：PolymeraseChainReaction，聚合酶链式反映5.3.Ct：阈值循环，即荧光信号强度超出设立的阈值强度时所经历的循环数6.内容6.1.原理CHO工程细胞所体现的蛋白质产品，其外源性DNA残留量的测定采用荧光定量PCR法。该办法是以荧光定量PCR仪为设备平台基础，选择CHO细胞中含量较丰富的一段LTR（longtandemrepeat，长串联重复序列）为靶标序列设计扩增引物，建立基于Taqman探针的定量检测实验。用已知量的CHO细胞基因组DNA做原则曲线，通过对Ct值进行线性回归计算样品中DNA的含量。6.2.实验材料6.2.1.试药与试液6.2.1.1.灭菌水使用电阻率不低于18.2MΩ·cm的超纯水，121℃灭菌20分钟以上。本办法全部试液均用灭菌水配制。6.2.1.2.1mol/LTris-HCl缓冲液（pH=8.0）称取60.57g三羟甲基氨基甲烷（Tris），溶于400ml水中，用盐酸调节pH值到8.0，加水至500ml。室温保存。6.2.1.3.0.5mol/LEDTA溶液（pH=8.0）称取93.06g乙二酸四乙酸二钠，溶于400ml水中，用氢氧化钠调节pH值到8.0，加水至...
