2025年流行性乙型脑炎灭活疫苗制造及检定规程VIP专享VIP免费

流行性乙型脑炎灭活疫苗制造及检定规程流行性乙型脑炎（下称乙脑）灭活疫苗是将乙脑病毒接种于地鼠肾细胞，哺育后收获病毒液，加入甲醛溶液将病毒杀死后制成。用于防止乙脑。1毒种1.1毒种来源P3株病毒，每3～5年应用新分离的乙脑流行株病毒检查P3株的保护力，以理解该毒株的有效性。P3株干燥毒种由中国药品生物制品检定所分发。1.2毒种检定1.2.1无菌实验毒种启封和每次传代后均需做无菌实验，合格者方可使用。1.2.2病毒滴定每正代必须用体重7～9g小白鼠进行脑内滴定，滴度≥9.0LogLD50/1.0ml可用于生产。1.2.3纯毒实验生产前和生产末期用小白鼠做脑内法中和实验，以鉴定毒种的特异性。所用特异性抗血清由中国药品生物制品检定所提供。中和指数必须在500以上。生产过程中如对毒种发生疑问，应及时进行鉴定。1.3毒种传代分正亚代传递。从检定所取回的干燥毒种传递不超出15代称正代，由正代传递一代直接用于生产称亚代。每次用于传代的毒种不得少于3个鼠脑。传代时选用体重7～9g健康小白鼠或乳鼠，脑内接种病毒，72小时后选眼结膜正常，有典型痉挛战粟、肢体麻痹的小白鼠，无菌取脑并进行无菌实验。1.4毒种保存鼠脑毒种收剖经无菌实验后立刻保存于-60℃下列，无菌实验通过后方可使用。亦可将鼠脑毒种研磨乳化制成10%脑悬液，分装小瓶冻存于-60℃下列，无菌实验合格后备用。2疫苗制造2.1细胞制备2.1.1地鼠选用健康地鼠。如发现肾脏异常或有乳糜状腹水，应废弃。2.1.2细胞消化及培养取肾剪碎，用适量的胰蛋白酶溶液消化。用营养液分散细胞，制备细胞悬液，分装培养瓶，于37℃进行培养。营养液中牛血清含量不得超出8%。2.1.3外源因子检查每生产批细胞留5%（或不少于500ml）悬液作为对照细胞检查外源病毒。该细胞除不接种病毒外，细胞浓度和解决均与生产过程平行进行，至原液收获之日用显微镜观察，应无病变发生。并用0.2%～0.5%豚鼠红细胞（4℃保存不超出7天）进行血吸附实验，置4～8℃30分钟鉴定成果，再置20～25℃30分钟再次鉴定成果，均应为阴性。如有可疑病变或血吸附可疑阳性，在同种细胞上继续盲传，如传出病毒，该批细胞制备的疫苗应予废弃。2.2病毒接种和哺育挑选生长良好的细胞瓶，充足淋洗细胞后加入适量维持液，接种病毒，病毒量不得＞7.0LogLD50/1.0ml。在适宜温度下哺育适宜时间，弃去病毒培养液，换以新维持液，继续哺育一定时间。疫苗生产过程中不得加青霉素或其它β内酰胺类抗生素。2.3原液2.3.1过滤选择有典型细胞病变的培养瓶，经肉眼检查无菌者进行澄清过滤，细胞质量好时，可再加入新维持液，继续哺育，再次收获病毒液。2.3.2病毒灭活过滤后的原液，于取出无菌实验和病毒滴定样品后加入甲醛溶液，其最后浓度不得超出0.05%，置适宜温度下一定时间灭活病毒。过滤后加入硫柳汞防腐剂，其最后浓度不得超出0.01%。2.3.3原液检定2.3.3.1无菌实验按《生物制品无菌实验规程》进行。2.3.3.2病毒滴定每个滴定批代表疫苗不得超出15万ml，将样品10倍系列稀释，取最少3个稀释度，每个稀释度用体重7～9g小白鼠4只，每只脑内接种0.03ml，逐日观察，3日内死亡者不计，观察14天，滴度≥7.0LogLD50/1.0ml判为合格，不合格者可重试一次。2.4半成品2.4.1半成品取样无菌实验合格及病毒灭活到期的疫苗原液，取样做灭活实验、效力实验和无菌实验。每次解剖的地鼠制备的疫苗为一生产批，按生产批进行检定，但每批灭活实验代表疫苗量不得超出15万ml，每批效力实验代表疫苗量不得超出100万ml。无菌实验按《生物制品无菌实验规程》进行。2.4.2半成品检定2.4.2.1灭活实验（1）动物法：将样品脑内接种体重12～14g小白鼠8只，每只0.03ml，同时腹腔接种0.5ml，为第一代；7天后将第一代小白鼠处死3只，取脑做成10%悬液，脑内接种6只小白鼠，为第二代；7天后将第二代小白鼠处死3只，同法接种6只小白鼠，为第三代。从接种之日起逐日观察14天，每代小白鼠除处死和接种后3日内非特异性死亡者外，全部健存为合格。若传代3后来有个别小白鼠死亡，应立刻取死鼠脑乳化成悬液再接种3只小白鼠，观察14天，该3只小白鼠健存仍判为合格。如仍有小白鼠死亡，该批疫苗应重试，重试合格后仍可使用。若传出活病毒应重试...