2025年叶绿素的提取分离VIP免费

华南师范大学实验报告学生姓名罗玉玲学号2501014专业生物科学年级、班级10科四课程名称植物生理学实验实验项目植物生理学第一次实验实验类型□验证□设计□综合实验时间年11月8日实验指导老师叶庆生、冷佳奕实验评分叶绿体色素的提取、分离及理化性质的鉴定1.实验目的1.1学会叶绿体色素提取和分离的办法。1.2理解叶绿体色素的荧光现象、皂化反映等理化性质。2.实验原理2.1叶绿体中含有绿色素（涉及叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（涉及胡萝卜素和叶黄素）两大类，这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。2.2叶绿素是二羧酸酯，与强碱反映形成绿色的可溶性叶绿素盐，可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开；在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg2+可依次被H+和Cu2+取代，形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素；叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。3.实验器材和试剂3.1实验仪器与器具研钵、漏斗、剪刀、、圆形滤纸、分光光度计、电子天平、量筒、移液管、滴管、试管、试管架、酒精灯等3.2实验试剂丙酮、石英砂、碳酸钙、四氯化碳、无水氯化钠、乙醚等3.3实验材料勒杜鹃叶片4.实验环节4.1叶绿素提取取2g勒杜鹃叶片去掉主脉，剪碎研磨圆形滤纸过滤收集提取液4.2荧光现象观察透射光下观察溶液颜色叶绿素提取液反色光下观察溶液颜色4.3光对叶绿素的破坏作用色素提取液少量等量分装于两试管一支处在黑暗、另一支于太阳光下经2h后观察两支试管的颜色4.4铜代反映取一支作为对照各取色素提取液2ml于两支试管中取另一支变褐色后观察颜色的变化4.5皂化反映取色素提取液10mL于分液漏斗摇匀沿漏斗边沿加入30mL蒸馏水轻轻摇动静置分层弃去下层丙酮和水蒸馏水冲洗乙醚溶液1次摇动分液漏斗后静止10分钟加入20mL丙酮少量乙酸铜粉末滴加一滴稀盐酸少量石英砂、碳酸钙△加入5mL30%KOH甲醇溶液加入20mL乙醚加入蒸馏水10mL摇动后静置将黄色素与绿色素层分装于2支试管中4.6色素吸取光谱曲线的观察将皂化反映得到的两管色素液注入比色杯中，另取超纯水作空白对照用分光光度计在400~700nm测得色素吸取光谱曲线5.实验成果5.1荧光现象观察色素提取液在钨丝灯直射下，色素溶液的颜色透射光是为绿色反射光时为红黑色。这是由于叶绿素分子不吸取绿光，在透射光下为绿色，而叶绿素受光激发后发射的红色荧光，因此反射光下可见红黑色。5.2光对叶绿素的破坏作用图一提取液在黑暗解决、光照后的实验现象黑暗处色素溶液颜色没有变化，仍然呈现出绿色，如上图左侧试管中的溶液；经太阳光解决后色素溶液颜色变深黑绿色，如上图右侧试管中的溶液。暗解决2h后的提取液光照解决2h后的提取液5.3铜代反映图二铜代反映实验过程中观察到的现象滴加浓HCl后色素色素提取液的颜色变为褐色，加入固体醋酸铜加热后，色素溶液颜色变回绿色5.4黄色素与绿色素的分离(皂化反映)滴加浓HCl加入固体醋酸铜加热图三乙醚萃取叶绿素成果图四黄色素与绿色素的分裂成果加入20mL乙醚到分液漏斗萃取色素后，色素溶于乙醚中，置于上层,如图三所示；加入5mL30%KOH-甲醇溶液后，叶绿素发生皂化反映，最后黄色素溶于乙醚中，置于上层；叶绿素溶于水中，置于下层，如图四所示。5.5色素吸取光谱曲线的观察色素层叶黄素层叶绿素层图五400~700nm测得色素吸取光谱曲线在400~700nm测得两大类色素的吸取光谱曲线如图五所示，从图中可知叶绿素有两个吸取高峰，分别为420nm左右、640nm；黄色素的吸取高峰则出现在420nm~460nm。6.分析与讨论6.1叶绿素可溶于有机溶剂中，可用丙酮、乙醇、乙醚、丙酮-乙醚、甲醇-石油醚等提取，本实验则用了丙酮提取，效果挺好的。6.2叶绿体中的色素所处的环境含有微碱性，实验中由于研磨会使细胞构造遭到破坏，细胞液（含有微酸性）流出，酸性的细胞液就会直接与叶绿体中的色素接触，致使叶绿素的分子构造遭到破坏，使叶绿素失镁，呈黄褐色。而碳酸钙是强碱弱酸盐，在水中的溶解度很小，但还是有一部分溶解后呈弱碱性，中和细胞液的酸性，保护了细胞中的色素。具体是叶绿素分子构造中含有一种镁原子，当细胞破裂时，细胞液内有机酸中的氢离子可取代美原子而成为褐色的去镁叶绿素...