病毒包装相关资料doc-siRNA化学合成VIP免费

3.RNAi 病毒包装3.1 腺病毒包装3.1.1 特点：1） 几乎可以感染所有类型的细胞。2） 可以获得复制缺陷型 (E1 和 E3 缺失) 的腺病毒。3） 病毒滴度高，产生病毒经过浓缩后可以达到 1012 PFU/mL，能有效的进行增殖。4） 腺病毒载体感染宿主的范围比较广，制备容易，操作简单.5） 感染细胞时，不整合到染色体中，不存在激活致癌基因或插入突变等危险，生物安全性高。3.1.2 原理：腺病毒 (Adenovirus，Ad) 是一种无包膜的线状双链 DNA 病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近 50 个血清型，大多数 Ad 载体都是基于血清型 2 和 5，通过转基因的方式取代 E1 和 E3 基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达 E1 和 E3 基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。3.1.3 腺病毒包装简要流程 (以 Invitrogen 包装系统为例)1） 构建表达 siRNA/miRNA 的腺病毒载体。2） 采用 PacI 消化纯化的质粒。3） 消化好的腺病毒表达载体转染 293A 细胞，收获细胞以制备病毒粗提液。4） 将病毒粗提液感染 293A 细胞以扩增病毒。5） 分装，- 80 oC 保存。 6） 滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。3.1.4 本公司提供的最终产品包括：1） 重组后的腺病毒载体质粒以及测序图谱。2） 产品无菌检测结果。3） 腺病毒储液及相应的病毒滴度。我们保证：1) 制备的病毒颗粒携带片段的正确性 2) 病毒颗粒的总数和病毒滴度：如无特殊要求我们提供 1mL 滴度为 1×1010 - 1×1012个病毒基因组 / mL 的病毒储液。3.2 慢病毒载体包装服务3.2.1 特点： 1） 直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合 RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。2） 可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。3） 可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。4） 无需任何转染试剂，操作简便。5） 可以根据客户需要制备多种标记。3.2.2 原理：慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的 siRNA / miRNA 慢病毒载体，与化学合成的 siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染...