生物化学实验报告一、实验目的1. 学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法；2. 学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法；3. 学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；4. 正确掌握使用离心机的方法步骤；5. 正确掌握使用分光光度计的方法步骤。二、实验原理1. 肝糖原的提取与鉴定糖原是生物的主要储能物质之一，主要储存与肝细胞中，采用研磨匀浆等方法可以使肝细胞破碎。肝细胞破碎，细胞内容物流出。低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能够稳定地保存在上清液中，从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的。糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。糖原水溶液呈乳样光泽 ，遇碘呈 红棕色 。此外，糖原还可以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织中糖原的存在。糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min 后会 出现砖红色沉淀 。2. 肝糖原的定量测定糖原在浓碱溶液中非常稳定，故可将肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，保留肝糖原。糖原可以被浓酸水解成葡萄糖，而浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成5-羟甲基呋喃甲醛，该化合物与蒽酮脱水缩合可以生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在10-100μ g，溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比。利用该反应原理处理标准葡萄糖溶液，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。三、材料与方法：1. 实验材料（1）肝糖原的提取与鉴定样品： 1.50g 的鸡肝试剂： 5%CCl3COOH、95%乙醇、蒸馏水、浓 HCl 溶液、50%NaOH溶液、碘试剂和班氏试剂仪器和器材：离心机、试管、玻璃棒、室温至100℃恒温水浴箱、剪刀、镊子、刻度吸管、微量加样枪和白瓷反应板（2）肝糖原的定量测定样品： 0.15g 的鸡肝试剂： 30%KOH溶液、蒸馏水、标准葡萄糖溶液和0.2%蒽酮溶液仪器和器材：室温至100℃恒温水浴箱、比色皿、分光光度计、试管、剪刀、镊子、刻度吸管和微量加样枪2. 实验流程（1）肝糖原的提取与鉴定用托盘天平称取 1.50g 的鸡肝，剪碎；加入 5%CCl3COOH 1 ml，研磨至乳状；加入 5%CCl3COOH 3 ml，研磨成肝匀浆；将肝匀浆全部转入离心管中，离心3 分钟（ 4000 r / min）；弃去沉淀，取上清液3ml；滴加 3ml 95%乙醇，混匀，静置10 分钟；离心 5 分钟（ 4000 r / min）；弃去上清液，往沉淀中滴加1ml 蒸馏水；沸水...
