免疫检测的基础知识VIP免费

免疫检测的基础知识ELISA 是一种免疫测定。免疫测定（immunoassay,IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。1.1 抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后,可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中,抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于 5000 的蛋白质,例如乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、甲胎蛋白（AFP）等。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的，称为半抗原（hapten）。例如某些激素、药物等。抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenicdeterminant），或称为表位（epitope）。一个抗原分子可带有不同的决定簇，例如中可带有等决定簇。1.2 抗体1.2.1 抗体的结构抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白（immunoglobulin,lg）。lg 分五类，即 IgG、IgA、IgM、IgD 和 IgE。与免疫测定有关的 Ig 主要为 IgG 和 IgM。lg 由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。lg 的轻链是相同的，有 K（kappa）和入（Lambda）两种型别。五类 Ig 的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG 和 IgM 的重链分别称为 Y（gamma）链和卩（mu）链。IgG 的结构见图。① 木瓜酶裂解部位② 胃蛋白酶裂解部重链和轻链的 N 端的氨基酸排列顺序因各种抗体而异，称为可变区，分别用 VH 和VL 表示。两者构成抗体的抗原结合部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生特异性结合（见图），是抗体专一性结合抗原的结构基础。IgG 可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段（Fab）。每个 Fab 都保存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称 Fc 段，无抗体活性，但具有 IgG特有的抗原性。IgG 可被胃蛋白酶分解为两个片段，一个 Fab 双体，称 F（ab'）2,能和两个相同的抗原结合；另一片段类似 Fc,随后被分解成小分子多肽，无生物活性。IgM 是由五个单体组成的五聚体，含 10 个重链和 10 个轻链，具有 10 个抗原结合价,由于空间位置的影响，只表现为五个抗原结合价。IgM 分子量约为 900000,IgG分子量约为 150000。机体被微生物感染后，先产生 IgM 抗体，然后产生 IgG 抗体。经过一段时间，IgM 抗体量逐渐减少而消失，而 IgG 抗体可长期存在，在疾病痊愈后可持续数年之久。IgM 抗...