外周血单个核细胞(PBMCs):包括淋巴细胞和单核细胞,其比重在1
090,而红细胞和多核白细胞比重在1
092 左右
分离淋巴细胞以密度1
077± 0
001 的分层液为佳
Ficoll 分离液法主要用于分离PBMCs ,是一种单次差速密度梯度离心法
聚蔗糖-泛影葡胺是一种较理想的细胞分层液,商品名Ficoll
分离时先将分层液置试管底层,然后将肝素抗凝全血以 Hanks 液或 PBS 液做适当稀释后,轻轻叠加在分层液的上面,使两者形成一个清晰的界面
水平式离心后,离心管中会出现几个不同层次的液体和细胞带:由于红细胞和粒细胞比重大于分层液,同时因红细胞在Ficoll 液中凝聚成串而沉于管底,血小板则因密度小而悬浮于血浆中,只有与分层液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分层液的界面之中, 呈白膜状为白膜层
吸取该层细胞,经洗涤离心重悬即为单个核细胞
本法分离单个核细胞纯度可达95%,淋巴细胞约占90~95 % ,细胞收率可达80%以上, 但室温超过 25℃时可影响细胞收率
辅助性 T 细胞的典型表面标志:CD3+CD4+CD8+
(Th1 主要分泌IL-2 ,IFN- γ 或 TNF- β等辅助细胞免疫或参与迟发型超敏反应;Th2 主要分泌 IL-4/5/6/10 等辅助体液免疫、 参与速发型超敏反应)细胞毒性 T 细胞的典型表面标志是CD3+CD4-CD8+
(CD3+CD8+CD30- 可认定为 Tc1 细胞;CD3+CD8+CD30+ 可认定为 Tc2)调节性 T 细胞:自然存在的,其典型标志为CD4+CD25+Foxp3+ (最重要的分子标记是一种转录因子Foxp3)成熟 B 细胞均表达CD19 ,B1 细胞 CD19+CD5+ ,B2 细胞 CD19+CD5- NK 细胞的典型标志:CD3-CD16+CD56+
单核 -巨噬细胞的典型表面标志