简答题6.为什么利用RNAi抑制一个基因的表达较利用反义RNA技术更为彻底
答:RNAi是外源或内源性的双链RNA进入细胞后引起与其同源的mRNA特异性降解
dsRNA进入细胞后,在Dicer作用下,分解为21-22bp的SiRNA
SiRNA结合相关酶,形成RNA介导的沉默复合物RISC
RISC在ATP作用下,将双链SiRNA变成单链SiRNA,进而成为有活性的RISC,又称为slicer
slicer与靶mRNA结合,导致其断裂,进而导致其彻底降解
反义RNA是与靶mRNA互补的RNA,它通过与靶mRNA特异结合而抑制其翻译表达,反义RNA是与靶mRNA是随机碰撞并通过碱基互补配对,所以,mRNA不一定完全被抑制
8.简述真核基因表达的调控机制
答:(1)DNA和染色质结构对转录的调控:①DNA甲基化,②组蛋白对基因表达的抑制,③染色质结构对基因表达的调控作用,④基因重排,⑤染色质的丢失,⑥基因扩增;(2)转录起始调控:①反式作用因子活性调节,包括表达调节、共价调节,配体调节等蛋白质相互作用调节),②反式作用因子与顺式作用原件结合对转录过程进行调控;(3)转录后调控:①5’端加帽和3’端多核苷酸化调控,②选择剪接调控,③mRNA运输调控,④mRNA稳定性调控;(4)翻译起始的调控:①阻遏蛋白的调控,②对翻译因子的调控,③对AUG的调控,④mRNA5’端非编码区的调控,⑤小分子RNA;(5)翻译后加工调控:①新生肽链的水解,②肽链中氨基酸的共价修饰,③信号肽调控
9.简述mRNA加工过程
答:(1)5′端加帽(由加帽酶催化5′端加入7-甲苷乌苷酸,形成帽子结构m7GpppmNP-)
(2)3′端加入Poly(A)尾(A、组蛋白的成熟mRNA无需加polyA尾;B、加尾信号包括AAUAAA和富含GU的序列;C、加尾不需模板;D剪切过程需要多种蛋白质因子的辅助)