学期实验安排学期实验安排蚕豆根尖细胞微核检测技术遗传学实验课第6周F1幼虫观察，释放伴性遗传及三点试验亲本授课老师：黄文超第6周F1幼虫观察，释放伴性遗传及三点试验亲本实验回顾野生型（19#）：+++红眼、长翅、直刚毛突变体（6#）：wmsn白眼、小翅、焦刚毛黑腹处（男女）果蝇组合设计，在培养瓶上做好标记：正交：野生型(+++)×三隐性突变体（abc）1瓶解读：19#雌性（5头）与6#雄性（5头）共处一室，看能发生什么故事?反交：三隐性突变体（abc）×野生型(+++)2瓶解读：6#雌性（5头）与19#雄性（5头）共处一室，看能发生什么故事?2个同学为1组，首先把观察镜调试好，一人负责一个号，将亲本蝇在麻醉瓶中麻醉，在观察镜下辨明雌雄，迅速转入平放于固定在实验台上的相应培养瓶，待麻醉的果蝇苏醒后，再将瓶放正即可；每组同学将果蝇的3间婚房放置于25℃温室中培养；第5周已完成受精卵受精卵：白色，椭圆形，：白色，椭圆形，22-24h22-24h后即可孵化后即可孵化幼虫幼虫：三龄幼虫体头部稍尖、有一：三龄幼虫体头部稍尖、有一黑色钩状口器，黑色钩状口器，2-32-3天后化蛹天后化蛹蛹蛹：颜色变深褐色，蛹体逐渐硬化，：颜色变深褐色，蛹体逐渐硬化，3-43-4天后羽化天后羽化成虫成虫：羽化：羽化8h8h后即可交配，雌蝇后即可交配，雌蝇在交配后在交配后22天即开始产卵，天即开始产卵，25℃25℃下成虫的可活下成虫的可活1515天天果蝇生活周期7天后，F1幼虫出现，在实验室外放飞亲本果蝇；7天后，麻醉、观察全部F1成虫性状，并每组合各选5对接入新的培养瓶中继续培养；1瓶正交观察后放飞窗外2瓶反交观察后各选5/10对接入新的培养瓶中继续培养7天后，F2幼虫出现，倒出F1亲本果蝇；7天后，麻醉、观察全部F2成虫性状。思考与分析1只雄果蝇1生中可以交配多少次1只雌果蝇1生中可以产卵多少枚影响果蝇产卵的因素，卵是否都可以正常发育您掌控的培养瓶里果蝇产卵的情况与对策蚕豆根尖细胞微核检测技术第6周实验目的了解微核检测的原理和毒理遗传学意义学习蚕豆根尖微核检测技术实验原理微核产生过程:细胞经处理后，其有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片不能向两极移动，游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，则产生一到几个很小的圆形结构，这就是微核。微核(micronuclei,MCN):是真核生物细胞经辐射或化学药物作用而产生的一种游离于主核之外的异常核结构。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形,直径大约是细胞直径的1/20～1/5。微核形态微核微核微核微核微核微核微核微核微核微核检测的意义:微核率的大小与用药剂量或辐射累积效应呈正相关，因此，微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤程度。微核测试已用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等方面。样品实测MCN‰平均值对照组MCN‰平均值0-1.50区间基本没有污染1.51-2.00区间为轻度污染2.01-3.50区间为中度污染3.51以上为重度污染污染指数(PI)=评价指标经NaCl、PbNO3、CrO3处理的蚕豆根尖分生区细胞蚕豆：拉丁学名：ViciafabaLinn，别称：胡豆、佛豆、川豆、倭豆、罗汉豆，双子叶植物，我国四川分布最多，次为云南和湖南蚕豆根尖实验材料实验步骤浸种催芽用高盐或重金属其中一种液体处理根尖，设对照（自来水），三次重复，室温放置30分钟；用自来水冲洗干净，放回铺有滤纸的培养皿，带回宿舍培养24h后，带到实验室滴加固定液固定，移入70%乙醇保存。用于观察。第5周已完成HCl解离：将酒精倒出，清水漂洗2次，加入6mol/LHCl，室温下解离10min至根尖软化；染色压片：倒去HCl，清水漂洗2次，每次3-5min。再用醋酸洋红染色，取根尖分生区压片观察；显微观察、统计微核细胞数目：每一处理观察3个根尖、1000个细胞，统计MCN‰，计算污染指数蚕豆根尖微核观察统计表微核数细胞数微千分率平均微千分率污染指数（PI）处理组对照组实验报告样品实测MCN‰平均值对照组MCN‰平均值污染指数(PI)=思考微核检测的意义微核产生的影响因素与处理设计为何要用植物根尖分生区进行检测
