方法学评价实验重复性实验VIP专享VIP免费

实验四方法学评价实验—重复性实验二方法学评价实验-重复性试验1、精密度：是指同一标本在一定条件下多次重复测定得到的一系列单次测定值之间接近程度。反应随机误差大小的指标，重复性试验是评价方法精密度的常用方法。2、重复性试验：将同一份标本分成数份实验标本，进行多次分析测定（一般为20次），目的在于评价或验证试验方法的随机误差或不精密度。3、批内重复性试验：在尽可能短的时间内进行5轮，每轮4次测定4、日内重复性试验：在一天内作5轮，每轮4次，获得20个数据。5、日间重复性试验：每天测定一份，连测20天。原理将同一份标本分成数份，在相同条件下（用同样的方法，同一种试剂和标准品，同一台仪器，在同一实验室由同一人操作），在尽可能短的时间内进行m轮，每轮n次重复测定，以获得批内精密度数据的试验方法（一般为20次，5轮，每轮4次）。其结果能反映各次测定结果互相接近的程度，用于客观评价测定方法随机误差的大小。一、己糖激酶法测定血清葡萄糖HK法测定葡萄糖的原理还原型NADPH的生成与葡萄糖浓度成正比，在波长340nm监测NADPH吸光度，可计算血清中葡萄糖的含量。葡萄糖+ATP←－－→葡萄糖-6-磷酸+ADP己糖激酶葡萄糖-6-磷酸+NADP+←－－－－－－→6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+葡萄糖-6-磷酸脱氢酶1.HK法测定血清葡萄糖试剂盒2.5.55mmol/L葡萄糖标准液3.分光光度计4.水浴箱5.试管、吸管等6.临床样本：根据医学决定水平收集临床混合血清样本三份（2.8、6.7、11.1mmol/L）（无肉眼可见溶血、脂血、黄疸）【试剂与器材】HK工作液配制：4R1+1R2HK法加入物质（ml）B（空白管）S（标准管）U（标本管）血清0.02葡萄糖标准液0.02去离子水0.02HK工作液1.01.01.0混匀，37℃水浴，10分钟，340nm测吸光度微量进样器量程0-100μl↓↓0μl20μl【注意事项】1.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。因为其不仅能抗凝，还能抑制糖分解2.本法用血量甚微，操作中应先加试剂后加标本，再吸试剂反复冲洗吸管（3次）3.使用微量进样器前应浸在溶液中来回拉几次，将针尖内气泡排尽。使用时容量指示芯拉动不得超过商标图案，谨防拉出。使用后应立刻进行清洗，防止芯子卡死、针尖堵塞。次数轮数123412345血清样本按照前述HK法血糖测定方法进行20次（5轮4次）平行测定。【操作步骤】【原始数据记录】【数据处理】Au血清葡萄糖（mmol/L）=×5.55As次数轮数1234123451.检验20次测定数据中的离群值，如存在异常值应剔除。对小样本量的测定，可以用Grubbs检验，其统计学公式是：Xd为离群值；X、s分别为包括离群值在内的均值、标准差，如果计算的G值大于系数表中相应显著性水平的a和测定次数n时的临界值Ga.n，则将Xd作为异常值舍去。SXXdG=测定次数显著性水平测定次数显著性水平(n)0.050.01(n)0.050.01112.2342.484372.8343.204122.2852.549382.8453.216132.3312.607392.8563.228142.3722.658402.8673.239152.4092.705412.8773.250162.4432.747422.8863.261172.4752.785432.8963.272182.5042.821442.9053.282192.5312.853452.9143.292202.5572.884462.9233.301212.5802.912472.9313.310222.6032.939482.9403.319232.6242.963492.9483.328242.6442.987502.9563.337252.6633.009603.033.41（1）只有一个离群值的情况：设有n个测定数（X1<