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一. 土壤样品的采集 第一种: 选择植被群落具有代表性的固定样方,除去地面植被和地表覆盖物,每样方采用土壤剖面法和多点混合取样法采样,将土样混匀,用四分法弃去多余样品,取500g 装入灭菌信封, 带回实验室后立即进行土壤微生物分离（4℃保存）、计数 。 第二种: 在小区内机械抽取 6 株样木，距树干基部 0.5 m 呈梅花形分布挖取根系周围 0～20 cm 、20～40 cm 和 40～60 cm 土样，分层充分混合后作为非根际土壤样品。同时采集各层直径小于 0.2～0.5 cm 细根上粘附的土壤，分层充分混合作为根际土壤。供微生物分析的鲜土样装入已消毒过的密封塑料袋，带入实验室。 二. 三大类土壤微生物分离与数量测定 1. 细菌的分离与数量测定 (1)以平板表面涂抹法计数。称取土壤鲜样10g 在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液，取稀释度为 10-3 ，10-4 ，10-5 ，10-6 ， 10-7 土壤悬浮液各 50μL，接种于盛有灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度 3 个重复，恒温(28 ℃) 培养 3d，选取每皿菌落数为 15-150 的1 个稀释度统计菌落数，按下列公式计算细菌数量： 菌数(cfu/ g) = （菌落平均数×稀释倍数）÷ 干土% （Ⅰ） 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，配方如下： 牛肉膏 3.0 g 琼脂 18 g 蛋白胨 5.0 g 蒸馏水 1000mL pH7.0 —7.2 2. 真菌的分离与数量测定 以平板表面涂抹法计数。即称取土壤鲜样10 g ,在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液,取稀释度为 10-2，10-3，10-4 的土壤悬浮液各 50μL，接种于盛有灭菌的马丁- 孟加拉红培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度 3 个重复,恒温(25 ℃) 培养 5～7 d，选取每皿菌落数为 15～150 的1 个稀释度统计菌落数计算真菌数量公式同公式（Ⅰ）。 马丁- 孟加拉红培养基，配方如下： 葡萄糖 10.0 g MgSO4.7H2O 1.0 g KH2PO4 1.0 g 琼脂 15 g 蛋 白 胨 5.0 g 孟 加 拉 红 (Rose Bangal) 每升 加 1% 溶 液 0.33mL 1% 链霉素 3 mL 蒸馏水 1000 mL pH 自然 临用前再加入1% 链霉素 3 mL 3. 放线菌数量测定 以平板表面涂抹法计数。除取稀释度为10–3，10–4，10-5 的土壤悬浮液各50μl 接种于盛有灭菌的改良高氏一号培养基外，其余与细菌数量测定方法相同。恒温(28℃) 培养7～10 d，按上述方法和公式统计菌落数并计算细菌数量。 培养基改...