平板划线法分离菌种和斜面接种培养VIP免费

试验二平板划线分离菌种与斜面接试验二平板划线分离菌种与斜面接种培养种培养一、实验目的：1.了解划线分离菌种的原理，并掌握操作方法。2.掌握微生物斜面接种培养的方法和微生物无菌操作技术。二、实验原理：1.平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。通常认为这种单菌落就是某个微生物的“纯种”。实际上由于同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，要获得可靠的纯种微生物，需进行多次划线分离。2.微生物能够在合适的培养基中生长。斜面接种法就是用灼烧、灭菌后的接种环，从菌种管中挑取少许菌苔，以无菌操作转移至另一支待接新鲜培养基上，自斜面底部开始向上作“Ｚ”状致密平行划线的操作过程。无菌操作接种是指为防止杂菌污染纯培养物而采取一系列预防措施后的接种过程。接种时应在火焰旁（即外焰区）完成菌种的转移过程。三、实验材料大肠杆菌菌种，枯草杆菌菌种，平板（含有培养基），斜面培养基，试管半固体培养基，接种针，接种环，酒精灯，标签纸或记号笔。四、操作步骤：倒平板→划线→培养→挑单菌落→接种移植→保存倒平板→划线→培养→挑单菌落→接种移植→保存（1）按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称1.平板划线（2）划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取上述10-1的土壤悬液一环在平板上划线。划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。常用的划线方法有下列二种：（a）用接种环挑取样品一环在平板培养基上作连续划线。划线完毕后，盖上皿盖，倒置适温培养。（b）用接种环以无菌操作挑取样品一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3―4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线划线完毕后，盖上皿盖，倒置于适温培养。倒置：１.防止灰尘散落到平板上2.防止水分的蒸发散失灼烧接种环：分段划线，除第一次划线（１区外）外，其后每一次的划线都是以上一区的部分划线为起始点（即菌源）。只有在每次划线后，将接种环上剩余物烧掉，才能实现等梯度稀释分离菌种。2.斜面接种培养（1）贴标签接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位置。(若用记号笔标记则不需标签)。（2）点燃酒精灯。（3）接种用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。简述如下：A.手持试管将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。B.旋松管塞先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。C.取接种环右手拿接种环(如握钢笔一样)，在火焰上将环端灼烧灭菌。然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。D.拔管塞用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。E.待接种环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。F.取菌接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。H.塞管塞取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时勿用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。I.灼烧接种环放下接种环，再旋紧棉花塞。G.接种火焰旁将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面。从斜面培养基底部向上作“Z”形密集划线，勿划破培养基,也可用接种针在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。（4）培养双管移植法双管移植法五五..注意事项：注意事项：1.1.划线时，环口与平板间的夹角不宜太大，动作要轻划...