1 蛋白质浓度的测定（Folin-酚试剂法）【实验目的】熟悉并掌握用 Folin-酚法测定蛋白质浓度的方法。【实验原理】蛋白质（或多肽）分子中含有酪氨酸或色氨酸，能与Folin-酚试剂起氧化还原反应，生成蓝色化合物， 蓝色的深浅与蛋白质浓度成正比，可通过绘制标准曲线，用比色法测定蛋白质浓度。【实验试剂】1.标准酪蛋白 200ug/ml 2.Folin-酚乙液（原液与水按1:1 比例混合，实验室已准备）3.Folin-酚甲液（实验室已准备）A 液4%Na2CO3: 0.2%NaOH=1：1 B 液1%CuSO4 : 2%酒石酸钾钠 =1：1 A：B= 50：1 混匀4.样品血清（稀释200 倍）【实验步骤】1. 准备 9 支干净的试管，按表一顺序加入试剂表一1 2 3 4 5 6 7 8 9 标准蛋白 /ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0 0 血清（稀释0 0 0 0 0 0 0.2 0.2 0.2 序号试 剂2 200 倍） /ml 水/ml 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.8 0.8 0.8 2. 各试管中加入 5ml Folin- 酚甲液，用旋涡摇匀器充分混合均匀，静置水浴 （37度） 10min。3. 各试管中加入 0.5ml Folin- 酚乙液，用旋涡摇匀气充分混合均匀， 静置水浴（37度） 30min。4. 使用分光光度计，用640nm 波长进行比色。【实验结果】表二 各试管中标准蛋白浓度和OD值序号1 2 3 4 5 6 7 8 9 标准蛋白浓度 ug/ml0 40 80 120 160 200 / / / ODλ =640nm0 0.09 0.139 0.206 0.261 0.309 0.177 0.177 0.17 A、B、C 三支试管中液体在640nm 处 OD 值的平均值为ODλ =640nm=（0.177+0.177+0.17 ）/3=0.175如图一 蛋白质浓度的标准曲线，当 OD=0.175时，标准蛋白质浓度为109.375μ g/ml，则 所 测 样 品 血 清 的 浓 度 为 109. 375μ g/ml ， 经 转 化 ， 样 品 血 清 浓 度 为10.9375g/100ml 图一 蛋白质浓度的标准曲线3 标准曲线y = 0.0016x00.050.10.150.20.250.30.35050100150200250标准蛋白浓度 ug/mlOD值【思考讨论】1. 结果分析，三组平行实验最终测得的OD 值理论上是一样的，但我们的实验结果中有一个数值偏离较大，给最终的实验结果带来误差。分析原因：①可能是因为加样的误差造成的三个试管中卵清蛋白的浓度不同，最终影响测定结果 ②可能是因为没有充分混匀， 导致每个试管中的浓度不同③可能是因为分光光度计自身误差造成的。2. 实验注意事项：（1） 在使用分光光度计时，拿比色皿要拿它的毛面，不可以用手接触它的光滑面，防止自己手上的油污导致测量值不准确。（2） 在比色皿中装入的液体量大约是比色皿体积的三分之二，太多容易洒出来，给测量造成不便，太少也容易造成测量的不准确。（3） 一定要注意实验时间，因为溶液的光密度值随时间会发生变化，时间太长会导致测量误差。
