融合蛋白表达系统VIP免费

可编辑ppt1第二章基因工程的工具酶与载体第三节表达载体二、融合蛋白表达系统可编辑ppt2表达载体的基本结构表达蛋白的识别？表达蛋白的分离？表达蛋白的活性？蛋白表达的高效性？蛋白表达的可控性？可编辑ppt31、融合蛋白表达系统的概念蛋白质融合表达是指外源基因与载体已有的担体蛋白的编码基因拼接在一起，并作为一个新的开放阅读框进行表达。目的基因目的基因启动子启动子担体基因担体基因接头接头MetMetStopStop载体可编辑ppt4β-半乳糖苷酶（LacZ）容易识别、免疫亲和分离绿色荧光蛋白（GFP）容易识别谷胱甘肽转移酶（GST）免疫亲和分离、维持良好构象金黄色葡萄球菌蛋白A（SAPA）免疫亲和分离泛素蛋白（Ubi）维持良好空间构象硫氧化还原蛋白（TrxA）维持良好空间构象2、用于融合蛋白构建的高表达的担体蛋白可编辑ppt5MCSpUC18/19载体LacZα目的蛋白3、融合蛋白表达载体可编辑ppt6T7载体系统His标签+目的蛋白可编辑ppt7谷胱甘肽S－转移酶（GST）融合蛋白表达系统ATGGST目的蛋白可编辑ppt8加强GFP表达的哺乳动物细胞融合蛋白表达质粒目的蛋白EGFP可编辑ppt9GFP融合蛋白的表达DNAT4连接酶SacI6100bpPstI6100bpSacI+PstI4700+1400bpCOS7细胞系目的基因ZNF325MCS目的基因ZNF325EGFP可编辑ppt10NN蛋白内切酶蛋白内切酶切割位点切割位点梭菌蛋白酶Arg-C梭菌蛋白酶Arg-C葡萄球菌蛋白酶Glu-C葡萄球菌蛋白酶Glu-C假单孢菌蛋白酶Lys-C假单孢菌蛋白酶Lys-C猪胰蛋白酶Arg-C猪胰蛋白酶Arg-CLys-CLys-CArgCArgCNNCC担体蛋白担体蛋白目的蛋白目的蛋白化学断裂法：溴化氰（CNBr）甲硫氨酸残基酶促裂解法单残基位点与多残基位点断裂法4、融合蛋白中目的蛋白的分离和回收可编辑ppt11启动子启动子担体基因担体基因接头接头目的基因目的基因MetMetStopStopIle-Glu-gly-Arg凝血因子Xa的识别、作用序列Ile-Glu-gly-Arg凝血因子Xa的识别、作用序列Ile-Glu-gly-ArgIle-Glu-gly-Arg表达表达亲和层析亲和层析酶解回收酶解回收酶促裂解法：多残基位点酶促裂解法：多残基位点4、融合蛋白中目的蛋白的分离和回收可编辑ppt12①表达率高，稳定性好；②通过亲和层析容易对担体蛋白进行分离和纯化；③可以帮助目的蛋白形成正确的空间结构。④容易将担体蛋白从目的蛋白中裂解出来。5、融合蛋白表达的优点可编辑ppt136、构建融合蛋白表达载体的注意事项目的蛋白的方向终止密码子问题目的基因移码问题ATG可编辑ppt14EcoRIP1引物P2引物BamHITGAACG终止密码子问题可编辑ppt15融合蛋白表达载体移码问题ATGCCAGACGGGCCCAATACC…TAA目的基因酶切末端加ATG之间的碱基序列必须是3的倍数！！可编辑ppt16融合蛋白在体表达--IRES序列的引入转基因斑马鱼的载体可编辑ppt17转基因果蝇的载体