RNA 提取检测注意事项 对 大 部 分 实 验 人 员 来 说 ，RNA 抽 提 比 基 因 组 DNA 抽 提 要 困 难 得 多 。事实 上， 现有的 RNA 抽 提 方法/试剂， 如果用于从培养细胞中抽 提 RNA， 比 抽 提 基 因 组 DNA 更方便， 成功率也更高。那为什么同样的方法用于组 织 RNA 的抽 提 ， 总会碰到问题呢？ 组 织 RNA 抽 提 失败的两大 现象是： RNA 降解和组 织内杂质的残留。关于降解问题， 首先看一下为什么从培养细胞中抽 提 RNA 不容易降解。现有的 RNA 抽 提 试剂， 都含有快速抑制 Rnase 的成分 。在培养细胞中加入裂解液， 简单的混匀， 即可使所有的细胞与裂解液充分 混匀， 细胞被彻底裂解。细胞被裂解后， 裂解液中的有效成分 立即抑制住细胞内的 Rnase， 所以 RNA 得 以保持完整。也就是说 ，培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分 接触， 所以其 RNA 不容易被降解；反过来 讲， 组 织中的 RNA 之所以容易被降解， 是因 为组 织中的细胞不容易迅速与裂解液充分 接触所致。因 此， 假定有一种办法，在抑制 RNA 活性的同时能使组 织变成单个细胞，降解问题也就可以彻底解决了。液氮碾磨就是最有效的这样一种办法。但是， 液氮碾磨方法非常麻烦， 如果碰到样品数比 较多 的时候更加会有此感觉。这样就产生了退而求其次的方法：匀浆器。匀浆器方法没有考虑细胞与裂解液接触前如何抑制 Rnase 活性这个问题， 而是祈祷破碎组 织的速度比 细胞内的 Rnase 降解 RNA 的速度快。电动匀浆器效果较好，玻璃匀浆器效果较差， 但总的来 说 ， 匀浆器方法是不能杜绝降解现象的 。因 此 ， 如 果 抽 提 出 现 降 解 ， 原 来 用 电 动 匀 浆 器 的 ， 改 用 液 氮 碾 磨 ；原 来 用 玻 璃 匀 浆 器 的 ， 改 用 电 动 匀 浆 器 或 者 直 接 用 液 氮 碾 磨 ， 问 题 几乎 100% 能 获 得 解 决 。影 响 后 续 实 验 的 杂 质 残 留 问 题 ， 其 原 因 比 降 解更 多 样 ， 解 决 方 法 相 应 也 不 同 。总 之 ， 如 果 出 现 降 解 现 象 或 者 组 织 内杂 质 残 留 现 象 ， 则 必 须 对 具 体 实 验 材 料 的 抽 提 方 法 /试 剂 进 行 优 化 。优 化 大 可 不 必 使 用 ...
