RNA 提取检测注意事项 对 大 部 分 实 验 人 员 来 说 ,RNA 抽 提 比 基 因 组 DNA 抽 提 要 困 难 得 多
事实 上, 现有的 RNA 抽 提 方法/试剂, 如果用于从培养细胞中抽 提 RNA, 比 抽 提 基 因 组 DNA 更方便, 成功率也更高
那为什么同样的方法用于组 织 RNA 的抽 提 , 总会碰到问题呢
组 织 RNA 抽 提 失败的两大 现象是: RNA 降解和组 织内杂质的残留
关于降解问题, 首先看一下为什么从培养细胞中抽 提 RNA 不容易降解
现有的 RNA 抽 提 试剂, 都含有快速抑制 Rnase 的成分
在培养细胞中加入裂解液, 简单的混匀, 即可使所有的细胞与裂解液充分 混匀, 细胞被彻底裂解
细胞被裂解后, 裂解液中的有效成分 立即抑制住细胞内的 Rnase, 所以 RNA 得 以保持完整
也就是说 ,培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分 接触, 所以其 RNA 不容易被降解;反过来 讲, 组 织中的 RNA 之所以容易被降解, 是因 为组 织中的细胞不容易迅速与裂解液充分 接触所致
因 此, 假定有一种办法,在抑制 RNA 活性的同时能使组 织变成单个细胞,降解问题也就可以彻底解决了
液氮碾磨就是最有效的这样一种办法
但是, 液氮碾磨方法非常麻烦, 如果碰到样品数比 较多 的时候更加会有此感觉
这样就产生了退而求其次的方法:匀浆器
匀浆器方法没有考虑细胞与裂解液接触前如何抑制 Rnase 活性这个问题, 而是祈祷破碎组 织的速度比 细胞内的 Rnase 降解 RNA 的速度快
电动匀浆器效果较好,玻璃匀浆器效果较差, 但总的来 说 , 匀浆器方法是不能杜绝降解现象的
因 此 , 如 果 抽 提 出 现 降 解 , 原 来 用 电 动 匀 浆 器 的 , 改 用 液 氮 碾 磨 ;原 来 用 玻 璃 匀 浆