2025年细胞增殖及细胞活力检测方法VIP免费

细胞增殖及细胞活力检测办法现在重要有两种用于检测细胞增殖能力的办法。一种是直接的办法，通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的办法，即细胞活力（cell viability）检测办法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然，细胞活力检测法并不能最后证明检测样品中的细胞与否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药品的干扰可克制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然能够分辨两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药品干扰组细胞数不不大于对照组的事实阐明药品可增进细胞增殖的结论。因此最直接的证据应当采用办法一。用于检测细胞增殖能力最典型的办法是用氚标记的胸腺嘧啶核苷解决细胞，再检测 DNA链中氚含量。若细胞含有增殖能力，DNA 合成过程中将会采用氚标记的胸腺嘧啶核苷作为合成原料，因此检测细胞 DNA 链内标记核苷酸的量可判断细胞与否进行 DNA 的合成。但更为惯用的办法是 BrdU 检测法。用 BrdU 预解决的细胞中，BrdU 可替代胸腺嘧啶核苷插入复制的 DNA 双链中，并且这种置换能够稳定存在，并带到子代细胞中。细胞通过固定和变性解决后，可用免疫学办法检测 DNA 中 BrdU 的含量（如采用鼠抗 BrdU 单克隆抗体特异识别 BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠 IgG 二抗标记，最后用比色法或荧光的办法进行定量测定），从而判断细胞的增殖能力。Calbiochem/EMD 公司提供一种 BrdU 检测试剂盒，以微孔板的形式，合并全部清洗、固定、变性的环节以单一试剂当中。比色检测在一抗二抗标记后在 450nm 下读数，全部操作在 3小时内结束。并且该试剂盒的敏捷度与市场上其它同类产品相比是最强的。1000 个细胞以上水平的检测只需用 BrdU 预孵育 2 小时，100 个细胞则采用过夜预孵育，即可检测细胞的增殖能力。BrdU 法的一种缺点是需要固定和变性等破坏 DNA 的解决。有些状况下，研究者可能但愿在测定细胞增殖能力的同时检测细胞的总 DNA 含量，然而，在变性条件下，DNA 的双链构造将被破坏，DAPI 和 Hoechest 33342 等核酸标记探针就不再能识别 DNA，因而也无法预计 DNA 总量。Molecular Probes 公司的 Click-iT EdU 检测试剂盒能够解决这个问题。这种办法不需要变性环节，由于荧光探针标记的叠氮化物小分子，而不是庞大的抗体分子，能够很容易的识别并结合未变性 DNA 双链中的 EdU 分子。采用 BrdU 办法时，你...