2025年细胞培养标准操作程序SOPVIP免费

细胞培养原则操作程序（SOP）1．目的：为了确保培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并对的执行细胞培养的基本操作环节，特制订实验室细胞培养操作流程。2．合用范畴：合用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。3．操作规程： 培养液、PBS、胰蛋白酶的配制 1000ml 培养液的配制 1、准备用品：培养粉、1000ml 烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH 仪、2～3 天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCO3 粉、1000ml 无菌玻璃瓶（100ml×10 个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2～3 个过滤器、注射器。紫外线照台 30min。2、将培养粉用 900ml 新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。3、充足搅拌，按阐明添加成分（如 Invitrogen 公司的 RPMI-1640 配制 1000ml 需加 NaHCO3 粉，Invitrogen 公司的 DMEM 需加 NaHCO3 粉等），再充足搅拌。无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。4、用 1M（1mol/L）HCl 调 PH 至左右（细胞适宜在～生长，配制好后 PH 值会升高～，故配时调 PH至左右）。5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到 1000ml。6、配青霉素 80 万 / 瓶 + 4ml 蒸馏水 溶解 配链霉素 100 万 / 瓶 + 4ml 蒸馏水 溶解 取青霉素和链霉素加入到 1000ml 培养液中，使其终浓度均为 100U/ml，充足搅拌混匀。7、在无菌操作台里用的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到 100ml 玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口，盖上橡皮塞，放-20℃保存备用。注意：（1）配制培养液及调节培养液 PH 值所使用的 HCl 和（或）NaOH 均需新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）配制。 普通于配制当天制备，以确保水的纯度和质量。（2）准备的 100ml×10 个玻璃瓶必须事先高压灭菌 ！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗 水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。 PBS （平衡盐溶液）的配制 NaCl 8g KCl ＋新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）至 1000ml Na2HPO4*H2O KH2PO4 （1） 无需调 PH 值，其成分溶解后 PH 为，不需除菌滤膜过滤除菌，放于 4℃保存，用前直接高压灭菌（高压时，装 PBS 的瓶子的瓶盖要插针头 !） （2） Na2HPO4*H2O 则 Na2HPO4*12 H2O 需 （3） 如欲配制 500ml，以上成分减半即可 % 胰蛋白酶的配制 胰蛋白酶粉 EDTA（乙二胺四乙酸二钠） NaCl KCl ` +新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）至 1000ML NaHCO3 Glucose(葡萄糖) 酚红 （1）配出来的 PH 值...