微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告记录2 ————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：3 微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告一、实验目的1. 学习微量凯氏定氮法的原理2. 掌握微量凯氏定氮法的操作技术（未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等）二、实验原理凯氏定氮法常用于测定天然有机物 （如蛋白质，核酸及氨基酸等）的含氮量。当天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水， 而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称为“消化”。此过程进行的相对较为缓慢， 通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高溶液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化过程：424423)(2SONHSOHNH322242NHOHSOCOSOH含氮有机物蒸馏：在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热4 蒸馏，即可释放出氨气。反应方程式如下：OHNHSONOHNSONH4424242aa2)(吸收与滴定：蒸馏所放出的氨，可用硼酸溶液进行吸收，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定， 直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止（即滴定至蓝紫色 ) ，最后根据所用标准酸的当量数（相当于待测物中氨的当量数）计算出待测物中的氮量。324333BOHNHBOHNH334324BOHCLNHHCLBOHNH三、实验试剂、材料和器材实验材料：食用面粉。实验试剂：浓硫酸、 30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、 0.01M HCL。实验器材： 凯氏烧瓶、电炉、凯氏定氮蒸馏装置、 锥形瓶、100ml容量瓶、酸式滴定管。四、操作步骤1. 消化（1）准确称取 1 克食用面粉， 用称量纸卷好小心送入至50 毫升的凯氏烧瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶颈上；5 （2）向另一烧瓶加入1ml 水作空白对照；在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物（克氏催化剂）少许，浓硫酸 10ml，小瓷片两粒，摇匀；（3）将烧瓶约 60 度角固定在铁架上，每个瓶口放一小漏斗，在通风厨内的电炉上消化；（4）在消化开始时，应控制火力，不要使液体冲到瓶颈；（5）待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明绿色为止；（6）消化完毕，待烧瓶内容物冷却后，加蒸馏水10ml（注意慢加，边加边摇）；（7）冷却后将瓶中内容物转入100ml 的容量瓶中，并用蒸馏水洗烧瓶数次，溶液一并倒入容量瓶，最后定容至刻度摇匀，做...
