- 1 - By V_First 选修三《现代生物技术》 基因工程 1.（2012全国卷新课标版）40．现代生物科技专题（15 分）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：· （１）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有 黏性末端 和 平末端 。 （２）质粒运载体用 EcoRⅠ切割后产生的片段如下： 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA 除可用 EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 能识别与 EcoR I 相同的核苷酸序列 。 （３）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA 连接酶有两类，即 大肠杆菌 DNA 连接酶和 T4 DNA 连接酶。 （４）反转录作用的模板是 mRNA ，产物是 cDNA 。若要在体外获得大量反转录产物，常采用 PCR 技术。 （５）基因工程中除质粒外， 动物病毒 和 噬菌体 也可作为运载体。 （６）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体 细 胞 ，原 因是 未 处 理 的大 肠 杆 菌 不 易 吸 收 重 组 质粒 。 2 .（2 0 1 2 福建卷）32．现代生物科技专题 肺细胞中的let-7 基因表达减弱，癌基因RAS 表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将 let-7 基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。 请回答： （１）进行过程①时，需用 限制 酶切开载体以插入 let-7 基因。载体应用 RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动 let-7 基因转录，该部位称为 启动子 。 - 2 - By V_First （２）进行过程②时，需用 胰蛋白 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。 （３）研究发现，let-7 基因能影响 RAS 的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取 RNA 进行分子杂交，以直接检测 let-7 基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 RAS 蛋白 （RASmRNA/RAS 蛋白）含量减少引起的。 3 .（2 0 1 2 山东卷）35．（8 分）【生物—现代生物科技专题】 毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转 KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。 （１）过程①中最常用的运载工具是_质粒_____，所需要的酶是限制酶和__DNA 连接酶_______。 （２）在过程②中，用_胰蛋白酶______处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于 5%CO2 的气体环...
