补体检测及补体参与的试验VIP专享VIP免费

临床免疫学与免疫学检验第十八章补体检测及补体参与的试验补体与补体系统的概念补体（complement）是存在于正常人或脊椎动物新鲜血清中的一种不耐热的成分，可辅助和补充特异性抗体介导的溶菌、溶血作用。补体系统（complementsystem）因补体并非单一成分，是由30余种可溶性蛋白和膜结合蛋白组成，故称为补体系统。补体系统根据各成分的功能不同，可分为补体固有成分、补体调节蛋白和补体受体三类。正常人体内补体成分的含量相对稳定。第一节补体的理化特性与生物学功能一、补体成分的理化特性补体成分为糖蛋白和球蛋白（大多是β，少数为α或γ)，分子量在25kD（D因子）～550kD（C4bp）之间。血清补体蛋白总量约为4g/L，约占血清球蛋白的10%、血清总蛋白的5%～6%，其中C3含量最高，可达1.3g/L。补体成分的性质不稳定，易受理化因素影响，如5630℃分钟即被灭活；在室温下也会很快失活；在0℃～10℃条件下，补体活性只能保持3天～4天，故补体应保存在-20℃以下或冷冻干燥保存。紫外线照射、机械震荡、强酸、强碱、乙醇或蛋白酶等也可使补体灭活。二、补体系统的激活正常情况下，体内绝大多数补体成分通常以无活性形式存在，只有活化后才能发挥其生物学作用。补体系统可经三条途径激活。经典激活途径（经典途径）凝集素激活途径（MBL途径）旁路激活途径（替代途径）补体系统三条激活途径示意图三、补体系统的生物学功能溶解细胞、溶解细菌和病毒的作用。调理作用，促进吞噬细胞的吞噬。免疫黏附作用，清除循环免疫复合物。炎症介质作用，C5a、C3a和C4a等引起炎症反应。参与特异性免疫应答。第二节血清总补体活性测定一、CP-CH50CP-CH50是检测补体经典激活途径的溶血活性，与C1～C9各组分的量及活性均有关。原理是SRBC与溶血素结合成复合物后，可激活血清中的补体导致SRBC肿胀而发生溶解（即溶血）。常以50%溶血作为判定终点，它比100%溶血更敏感，故该实验方法称为50%补体溶血实验（50%complementhemolysis，CH50）。引起50%溶血所需要的最小补体量为一个CH50单位（U），通过计算可测定出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50（kU/L）表示。CP-CH50当SRBC和溶血素量一定时，溶血程度与补体量及活性呈正相关，为特殊的S形曲线。在轻微溶血和接近完全溶血时，对补体含量的变化不敏感；在30%～70%之间几乎呈直线，补体含量稍有变动就会造成溶血程度的明显改变。CP-CH50测定方法稀释缓冲液：pH7.2～7.4的巴比妥缓冲液（BBS）或磷酸缓冲液。2%SRBC悬液溶血素：商品溶血素按说明的效价稀释使用。自制溶血素先加热灭活补体后，按表18-1滴定效价，测定补体活性时大多使用2个单位的溶血素。50%溶血标准管：取2%SRBC悬液0.5ml加蒸馏水2ml充分混匀，即为全溶血管；向全溶血管加BBS2.5ml。50%溶血总补体活性的测定：按表18-2操作。50%溶血总补体活性的计算：以最接近50%溶血标准管的测定管为终点管，按公式（1/终点管稀释血清的用量×稀释度）计算CH50值（kU/L）。CP-CH50CP-CH50CP-CH50的方法评价方法简便、快速，但敏感性较低。结果反映C1～C9等各成分的量和活性的综合水平。所用稀释缓冲液、SRBC的数量和状态、待测血清的新鲜程度、反应温度、pH、离子强度以及反应容器的洁净程度等多种因素均可影响血清总补体活性测定的结果。每次试验都需要使用新鲜的SRBC，为手工操作的半定量试验，结果难以令人满意。二、脂质体均相免疫溶破试验试剂1：脂质体，其内部水相中包入水溶性的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH），双层内包裹抗原-二硝基苯酚（DNP）。试剂2：羊抗DNP抗体和酶底物，底物为6·磷酸萄萄糖（G6P）和辅酶1（NAD）。反应过程：羊抗DNP抗体与脂质体上DNP结合成抗原-抗体复合物，待测血清中的补体被激活，攻击破坏脂质体膜，释放出G-6-PDH与酶底物（G6P和NAD）发生反应，产生NADH。340nm处测吸光度（A），A值与待测血清中的补体活性成一定比例关系。该法不使用SRBC，血清用量少，影响因素少，操作简便、快速准确，适用于自动分析仪测定。三、AP-CH50为测定血清补体旁路激活途径溶血功能的试验。其原理是家兔红细胞未经致敏可直接激活人血清中的B因子，引起旁路途径活化，导致兔红细胞溶解。溶...