抗菌试验方法VIP免费

一、抗菌实验字体[ 大][ 中][ 小]( 一) 体外抗菌实验1. 实验前的准备工作(1) 培养基的准备：肉汤琼脂培养基、 真菌琼脂培养基等均可按药典规定的方法配制。(2) 药液的准备：一般采用中草药水煎液，经滤过浓缩成1 ：10 ～1 ：1 的浓度，试验前的药液需灭菌，以免污染影响结果。(3) 试验菌株的选择及制备：一般使用典型的菌株，或从临床分离经鉴定后取得的菌株，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌、链球菌、肺炎双球菌、白色念珠菌、酵母菌及真菌等。细菌菌液的制备：将斜面菌种接种于普通肉汤培养基中，肺炎双球菌及溶血性链球菌须在上述培养基中加入5% ～10% 血清，或加入 25%(V/V)或 20% 猪血水，37 ℃培养 6 ～8 小时或 16 ～18 小时。真菌菌液的制备：将菌种接种于大试管中，并在22 ℃～ 25 ℃培养 24 小时或 7 天( 视菌种及生长速度而定) ，然后用灭菌生理盐水10mL洗脱制成混悬液。菌液的浓度一般先采用培养液，如不显示抗菌作用，可再稀释成一定浓度。金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌可用1 ：1000浓度，肺炎双球菌、溶血性链球菌、白色念珠菌、酵母菌可用1 ：10 或 1 ：100 浓度。2. 实验方法(1) 平碟法： 取熔化后的培养基，每平碟 ( 培养皿 )倒入 15mL ，待凝固后， 在培养基表面划线接种试验菌株，在划线的中间位置安放一个灭菌的不锈钢圈，在圈内滴入试验药液。也可采用打洞法， 即在凝固的培养基上用已灭菌的打孔器打孔挖去琼脂块，将药液滴在洞内。用灭菌陶盖盖好，细菌在37 ℃、真菌在22 ℃～ 25 ℃培养 18 ～20 小时，观察细菌生长情况，如全线生长则认为该浓度的药液无抗菌作用，如细菌或真菌划线为药液所切断，则认为该浓度药液有抗菌作用。(2) 平碟稀释法：先将中药药液2mL加入平碟内，再加入已溶化的培养基8mL ，充分摇匀， 待凝固后， 划线接种菌株， 同时用水 2mL 代替药液制作空白对照平碟，方法同样，接种后，将平碟倒置，在37 ℃ ( 真菌在 22 ℃～ 25 ℃) 培养 18 ～ 20 小时，观察结果。如对照碟长菌、药液碟不长菌，则认为有抗菌作用。(3) 试管法：取试管12 支，在每一试管中加入培养基5mL ，于第 1 管中加被试药液5mL ，混合均匀，吸出5mL 加到第 2 管中，混合均匀，再吸5mL 加到第 3 管中，依次操作，直到第10 管，将第 10 管混合均匀后吸出5mL 弃去，其药液稀释依次为1 ：2 ，1 ：4 ，...