实验八 土壤微生物的分离和纯化 一、目的 1．了解从土壤中分离与纯化微生物的基本原理及方法。 2．掌握几种常用的分离的基本操作技术。 二、原理 在自然界中，土壤是微生物生活中的最适宜的环境，土壤中存在大量的微生物，但土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，因此，为了研究某一微生物的特性，或者要大量地培养和利用某种微生物，必须把它们从这些混杂的微生物群中分离出来。从而获得某一菌株的纯培养。这种获得纯培养的方法称之为微生物的分离和纯化 三、器材 1．牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏 l号培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基。 2．盛有 100 毫升无菌水的三角瓶，9 毫升无菌水的试管，无菌吸管，无菌玻璃涂抹棒，10％的酚液，25％的乳酸，土样，接种环，标签。 四、方法 (一)涂抹平板分离法 1．制备土壤稀释液 称取土样10 克，放入装有玻璃珠和 100 毫升无菌水的三角瓶中，振摇15—20 分钟，使土与水充分混合，将菌分散，静止片刻，用吸管从中吸取1 毫升土壤悬液注人盛有 9毫升无菌水试管中，吹吸三次，并振摇使之充分混匀，然后再吸取1毫升注入另一支盛有 9毫升无菌水的试管中，以此类推制成10-1、10-2、l0-3、10-4、l0-5……的各种稀释度的土壤悬液。 2．倒平板 将牛肉膏蛋白胨培养基，高氏 1号培养基，马铃薯蔗糖培养基溶化。待冷至50—60℃时，在高氏 l号培养基中加入10％酚 2滴，在马铃薯蔗糖培养基中加入25％乳酸2滴，然后分别倒平板，每支培养基倒一皿(用右手持盛培养基的试管，左手拨出棉花塞，试管口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿在火焰附近打开少许，迅速注入培养基，加盖后轻轻摇动培养皿使培养基均匀分布，平放在桌面上，待凝后即成平板。(见图 18)。 3．涂抹 将上述每种培养基平板标上 10-3、10-4、10-5稀释度，然后用无菌吸管分别从 10-5、10-4、10-3稀释度的试管中吸取土壤悬液，每一平板注入0.2毫升，再用灭菌玻璃涂抹刮棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，静止5分钟。 4．培养 将培养皿倒置，放在 28℃温箱培养。 5．移接 将培养后长出的单个菌落分别移接到三种斜面培养基上，2 8 ℃下培养，待菌苔长出后检查菌苔是否纯，若有其他杂菌，要进一步进行分离纯化，直到获得纯培养，整个分离过程(见图 19)。 图 17 接种工具 图 18 倒平板 图 19 从土壤分离微生物的操作过程 (二)平板划线分离法 1 ．倒平板：按上述三种培养基各倒一平板、冷凝。 2 ．划线：右手...
