基因治疗的策略
答:1、基因置换或称基因矫正:特定的目的基因导入特定的细胞,通过定位重组,让导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因,不涉及基因组的任何改变
基因添加:通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因
基因干预:采用特定的方式抑制某个基因的表达,或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达,以达到治疗疾病的目的
自^杀基因治疗:将“自^杀”基因导入宿主细胞中,这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物,诱导靶细胞产生“自^杀”效应
PCR 的基本原理
答:PCR 是在试管中进行的 DNA 复制反应,基本原理是依据细胞内 DNA 半保留复制的机理,以及体外 DNA 分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质,人为地控制体外合成系统的温度,以促使双链DNA 变成单链,单链DNA 与人工合成的引物退火,然后耐热DNA 聚合酶以 dNTP 为原料使引物沿着单链模板延伸为双链DNA
PCR 全过程每一步的转换是通过温度的改变来控制的
需要重复进行 DNA 模板解链、引物与模板DNA 结合、DNA聚合酶催化新生 DNA 的合成,即高温变性、低温退火、中温延伸3个步骤构成PCR 反应的一个循环,此循环的反复进行,就可使目的 DNA 得以迅速扩增
DNA 模板变性:模板双链DNA
单链DNA,94℃
退火:引物+单链DNA
杂交链,引物的 Tm 值
引物的延伸:温度至 70 ℃左右, Taq DNA 聚合酶以4种 dNTP 为原料,以目的 DNA 为模板,催化以引物3’末端为起点的 5’→ 3’DNA 链延伸反应,形成新生 DNA 链
新合成的引物延伸链经过变性后又可作为下一轮循环反应的模板PCR,就是如此反复循环,使目的 DNA 得到高效快速扩增
本章的主要内容: 基因表达调控的基本概念、特点、基本原理
乳糖操纵子的结构、负性调控、正性