血凝克制（HI）实验介绍（以禽流感病毒为例）一、原理流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，含有识别并吸附于红细胞表面受体的构造，HA 实验由此得名。HA 蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰 HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现克制现象。二、应用该实验是现在 WHO 进行全球流感监测所普遍采用的实验办法。可用于流感病毒分离株 HA 亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中与否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。三、缺点只有当抗原和抗体 HA 亚型相一致时才干出现 HI 现象，各亚型间无明显交叉反映；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次实验时进行抗原原则化；需要对的判读的技能。四、实验环节1 阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖 2.05g、柠檬酸钠 0.8g、柠檬酸 0.055g、氯化钠 0.42g，加蒸馏水至 100mL，散热溶解后调 pH 值至6.1，69kPa 15min 高压灭菌，4℃保存备用。（3.8%枸橼酸钠（3.8g 枸橼酸钠，100ml 超纯水），101 kPa,20min 高压灭菌，4℃保存备用,保存期 1 个月）。2 10%和 1%鸡红细胞液的制备2.1 采血 用注射器吸取阿氏液约 1mL（3.8%枸橼酸钠），取最少2 只 SPF 鸡（如果没有 SPF 鸡，可用常规实验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约 2～4mL，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装 10mL 阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。2.2 洗涤鸡红细胞 将离心管中的血液经 1500～1800 r/min 离心 8 分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经 1500～1800 r/min 离心 8 分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复 2 次以上过程后，加入阿氏液 20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超出 5 天。2.3 10%鸡红细胞悬液 取阿氏液保存不超出 5 天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心 1500～1800 r/min 8 分钟，弃去上清液，精确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入 9 倍体积(mL)的生理盐水，用吸管重复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。（此步可省略，直接配制 1%红细胞）2.4 1%鸡红细胞液 取混合均匀的 10%鸡红细胞悬液 1 mL，加入 9 mL 生理盐水，混合均匀即可。（根据检测血清的数量，估算一下需要的 1%鸡红细胞量，可按 0.3ml/每份血清）3 抗原血凝效价测定（HA 实验，微量法）3.1 在微量反映板的 1 孔～12 孔均加入 ...
