单克隆抗体技术及其应用孟卫青VIP免费

FishDiseaseResearchCenterFishDiseaseResearchCenter•单克隆抗体技术及其应用讲解人：孟卫青单克隆抗体技术简介一二三四五单克隆抗体的制备过程基因工程抗体制备技术鼠源抗体人源化六七抗人CD3抗体基本来源基因工程抗体的广泛应用已批准上市的治疗性单抗培训大纲FishDiseaseResearchCenter1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。单克隆抗体（单克隆抗体（monoclonalantibodymonoclonalantibody））：针对预定抗原的同一抗原决定簇的，高度同质的，且能保证无限量供应的抗体。单克隆抗体技术的理论依据单克隆抗体技术的理论依据：抗体的多样性、克隆选择学说、抗体基因的重排理论、抗体结构与生物合成机制。一.单克隆抗体技术简介FishDiseaseResearchCenter骨髓瘤细胞（SP2/O-Ag14）：1.1单克隆技术的原理丧失合成次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（hypoxanthineguanosinephosphoribosyltransferase，HGPRT－）无法在HAT选择培养剂中生长能无限地快速增殖既不合成轻链又不合成重链小鼠脾细胞（B-Cell）：合成和分泌特异性抗体无法进行体外长期培养脾细胞－SP2/O融合细胞：HGPRT＋，能在HAT选择培养剂中生长能无限地快速增殖合成和分泌特异性抗体HAT次黄嘌呤，甲氨喋呤，胸腺嘧啶核苷FishDiseaseResearchCenter二.单克隆抗体的制备过程FishDiseaseResearchCenter2.1单克隆抗体制备过程的注意事项严格进行无菌操作，防止污染（细菌、霉菌、支原体、细胞）根据实验的目标及时进行细胞的检测与筛选，（ELISA、(酶联免疫吸附实验)IFA（时间分辨免疫荧光）、凝集、中和…）对筛选得到的阳性细胞克隆进行早期单克隆（有限稀释法）在单克隆细胞建株过程中不定期验证检测防止单克隆细胞过度生长——老化死亡细胞融合的方法：1、仙台病毒，2、PEG/DMSO，3、电融合FishDiseaseResearchCenter22、治疗试剂、治疗试剂病毒等微生物的中和抗体抗毒素—蛇毒、破伤风毒素，等被动免疫治疗制剂“生物导弹”，肿瘤治疗等22、治疗试剂、治疗试剂病毒等微生物的中和抗体抗毒素—蛇毒、破伤风毒素，等被动免疫治疗制剂“生物导弹”，肿瘤治疗等33、分子生物学研究工具、分子生物学研究工具蛋白质等生物活性分子的纯化；蛋白质等生物活性分子的纯化；细胞生物学细胞生物学————组织定位；组织定位；分子病毒学分子病毒学————结构分析；结构分析；特定生物分子的功能研究；特定生物分子的功能研究；33、分子生物学研究工具、分子生物学研究工具蛋白质等生物活性分子的纯化；蛋白质等生物活性分子的纯化；细胞生物学细胞生物学————组织定位；组织定位；分子病毒学分子病毒学————结构分析；结构分析；特定生物分子的功能研究；特定生物分子的功能研究；11、免疫学快速诊断试剂（抗体）、免疫学快速诊断试剂（抗体）细菌细菌病毒病毒肿瘤因子肿瘤因子特定蛋白特定蛋白农残检测等农残检测等11、免疫学快速诊断试剂（抗体）、免疫学快速诊断试剂（抗体）细菌细菌病毒病毒肿瘤因子肿瘤因子特定蛋白特定蛋白农残检测等农残检测等诊断技术方法：ELISA（间接法、夹心法、竞争法）免疫荧光法胶体金放射免疫法••••••••••••2.2.单克隆抗体技术的应用FishDiseaseResearchCenterBDAC污染：培养环境、操作抗体分泌不足：支原体污染、细胞突变、培养体系有问题融合细胞不生长：PEG、血清、HAT培养基杂交瘤细胞难以克隆化：血清质量、细胞活性2.3单抗制备常见问题FishDiseaseResearchCenter三.基因工程抗体制备技术鼠源抗体人源化0102小分子抗体03抗体融合蛋白FishDiseaseResearchCenter3.1.单抗人源组分的分类0101020203030404鼠源单抗就是指鼠分泌的抗体，其所有序列都是鼠的，注射人体易产生人抗鼠反应(即HAMA反应)。嵌合单抗重点解释人源化单抗就是通过测定鼠源抗体的序列，截取其决定簇互补区的序列移植到人抗体的编码框中表达，并经过一定的亲和力测试和筛选，最终选出仍然具有特异性识别能力的单抗。全人源单抗目前主要是通过...