唾液中HAB血型物质测定VIP免费

唾液中HAB血型物质测定实验目的掌握唾液中HAB血型物质测定的原理、检测方法及注意事项熟悉唾液血型物质测定的临床应用用实验的方式检测学生唾液样本中的HAB血型物质及其效价HAB血型物质的分布红细胞表面体液：血清、唾液、胃液、精液、卵巢液、腹水分泌型与非分泌型临床应用测定唾液中血型物质辅助鉴定血型检查羊水，预测胎儿ABO血型实验原理：凝集抑制原理唾液中HAB血型物质红细胞的HAB抗原抗H、A、B特异性抗体抑制凝集反应凝集抑制试验待测抗原(唾液)已知抗体特异结合抗原抗体复合物NS＋同血型RBC唾液中HAB血型物质与相应抗体结合，抑制抗体与相应红细胞上抗原发生凝集反应无凝集颗粒为阳性阳性间接凝集抑制试验已知抗体无结合抗原抗体分散NS＋有凝集颗粒为阴性阴性待测抗原(唾液)同血型RBC实验仪器与试剂普通试管架、铁试管架小试管（塑料与玻璃）、电磁炉加样枪（50ul与1ml）、枪头抗A、B、(H)血清0.9%生理盐水A、B型静脉血吸管记号笔实验分组与任务分组：6-7位同学一组任务：以O血型同学的唾液样本为阴性对照，检测小组成员中的唾液样本中的HAB血型物质（只检测A与B，不检测H血型物质）及其效价。实验步骤一、唾液的预处理二、悬浮红细胞制备三、抗血清最适稀释度测定四、唾液中血型物质测定五、唾液中血型物质效价测定一、唾液的预处理唾液5～10ml（漱口后自然流出）2500rpm离心5min，去除沉淀和细胞上清液（置于玻璃试管）沸水浴中煮沸10min，2500rpm离心3min上清液（置于塑胶试管）二、2%悬浮红细胞制备A/B型静脉血（每班抽一支）2500rpm离心5min，去上清液压积红细胞加入2ml生理盐水，混匀2500rpm离心3min，去上清20ul压积红细胞+1ml生理盐水重复2次三、倍比稀释抗血清（抗A、B）50μlserum50μlmix50μlNS50μlmix50μlNS50μlmix50μlNS50μlmix50μlNS50μlNS50μlmix50μlNS50μlmix1:21:41:81:161:321:64123456三、抗血清最适稀释度测定稀释倍数248163264生理盐水稀释的抗A(B)血清（μl）5050505050502%A(B)型红细胞悬液1D1D1D1D1D1D混匀，1000rpm离心1min，观察凝集结果，选凝集反应为3+为标化血清最适稀释度。加入物（μl）抗A管抗B管A对照管B对照管待测唾液5050－－生理盐水－－5050抗-A血清50－50－抗-B血清－50－50混匀，置室温中和10min2%A型RBC50－50－2%B型RBC－50－50混匀，1000rpm离心1min，观察结果四、唾液中血型物质测定唾液中血型物质测定的预期结果抗A管抗B管抗H管盐水对照非分泌型3+3+4+3+A型分泌型－3+1～4+3+B型分泌型3+－1～4+3+O型分泌型3+3+－3+AB型分泌型－－1～3+3+实验结果判断•在抗-A，抗-B试管中，任何一管红细胞不凝集，均表示检出唾液中存在相应的血型物质•在抗-A，抗-B试管中，若凝集强度弱于盐水对照管，为弱分泌型。五、唾液中血型物质效价测定1.选分泌型同学的唾液测定血型物质的效价2.倍比稀释唾液：取洁净小试管9支，依次编号，向每支小试管中加入生理盐水50μl。向第1支小试管中加入唾液50μl，充分混匀，吸出50μl放入第2管，充分混匀后吸出50μl放入第3管，依次类推直至第8管，混匀后取出50μl弃去。第1～8管的唾液稀释度依次1:2,1:4，……1:256。3.按下表加入反应物质五、唾液中血型物质效价测定抗A(B)管(1-8管）盐水对照O型唾液唾液的稀释度248163264128256－1倍比稀释的唾液(μl)5050505050505050－50生理盐水－－－－－－－－50－最适稀释度抗-A(B)血清(μl)50505050505050505050混匀，置室温中和10min2%的A(B)型RBC生理盐水悬液50混匀，1000rpm离心1min，观察凝集反应。四五综合步骤：唾液中血型物质效价测定抗A(B)管盐水对照阳性对照O型唾液唾液的稀释度124816326412825611倍比稀释的唾液(μl)505050505050505050－5050生理盐水－－－－－－－－50－－最适稀释度抗-A(B)血清(μl)505050505050505050505050混匀，置室温中和10min2%的A(B)型RBC生理盐水悬液1D1D1D1D1D1D1D1D1D1D1D1D混匀，1000rpm离心1min，观察凝集反应实验结果判断•先观察第9、10管，在观察1-8号管•以抑制红细胞凝集的最后1管的稀释度倍数为该唾液分泌血型物质的效价，完全抑制和不完全抑制之间用显微镜观察。...