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医学免疫学实验免疫学教研室间接凝集抑制试验沉淀反应实验目的掌握间接凝集抑制试验、沉淀反应的操作及结果的正确观察、判断.熟悉间接凝集抑制试验、沉淀反应的原理.了解间接凝集抑制试验、沉淀反应的用途.间接凝集抑制实验分类及概念•血清学反应:在血清中进行的抗原抗体反应.凝集反应:在一定浓度的电解质环境中，颗粒性抗原和相应抗体反应能够产生肉眼可见的凝块。注意以下几个方面:第一:参与反应的抗原必须是体积较大的颗粒性抗原，比如说细菌、红细胞等，都属于颗粒性抗原的范畴。第二:必须是相应的抗原抗体才能发生凝集反应第三:必须有电解质的参与第四:凝集块是一种肉眼能够见到的细小均匀块状物质。间接凝集抑制试验可溶性抗原与相应抗体结合后并不能产生凝集反应，怎样才能用肉眼就能观察到可溶性抗原与相应抗体的结合呢？实验原理间接凝集示意图:间接凝集抑制示意图:妊娠免疫诊断试验孕妇尿中，绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。（HCG是可溶性抗原）反之，非孕妇尿中HCG含量甚微，不足以消耗掉抗HCG抗体。试验材料1、标本：非孕妇、待检尿２、试剂：兔抗人HCG血清、HCG致敏的乳胶颗粒３、器材：载玻片、滴管、玻棒实验方法加尿液标本加兔抗人HCG免疫血清加HCG致敏的乳胶颗粒观察结果待检尿非孕妇尿混匀静置2分钟混匀静置2分钟实验结果非孕妇尿出现均匀一致的白色细小凝集物。待检尿若出现凝集则为HCG阴性，若仍呈均匀浑浊乳状液则为HCG阳性。注意事项在加入抗HCG血清后，一定要将其充分混匀，静置1-2分钟后再进行下一步，这是为了使可溶性抗原与抗体能够充分反应，以免其反应不足造成假阳性。本次实验中，出现凝集现象的为实验阴性，不出现凝集现象的反而为阳性。临床意义人工流产或剖宫术后无胎盘组织残留者，HCG转为阴性。绒毛膜上皮癌、葡萄胎及睾丸畸胎瘤病人尿中，HCG含量远较正常妊娠尿液为高，将尿液作1∶200稀释后仍可呈阳性反应。术后可转为阴性，若仍为阳性应考滤手术不彻底或肿瘤已有转移。沉淀反应基本概念沉淀反应：可溶性抗原与相应的抗体结合，在有适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应的种类可分为环状沉淀反应、絮状反应和琼脂扩散等。可溶性Ag＋相应Ab肉眼可见沉淀物电解质比例适当分类：沉淀反应环状沉淀反应絮状反应琼脂扩散单向扩散双向扩散电泳火箭电泳对流免疫电泳＋单向扩散即将定量的抗体混合于琼脂中，待琼脂凝固后打孔加入抗原，孔中的抗原向四周扩散，在抗原与抗体的比例合适处呈现白色的沉淀环。沉淀环的大小与抗原的浓度成正比，故该试验是定量试验。双向扩散即将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散，在二者比例合适处形成白色沉淀线。电泳定义：即带电颗粒在电场的作用下向着相反的电极移动，称为电泳。原理：蛋白质是一种两性电解质，其具有游离的氨基和羧基，每种蛋白质都具有自己的等电点（PI)，等电点的高低取决于蛋白质的性质，在等电点时，蛋白质带正负电荷相等。在ph›PI时，羧基解离得多，致使蛋白质带负电荷，向着正极移动。在ph‹PI时，氨基解离得多，带正电荷，向着负极移动。火箭免疫电泳单向扩散+电泳：将单向扩散与电泳技术相结合的一种方法。沉淀峰的高度与抗原的浓度成正比。对流免疫电泳的原理蛋白质抗原在碱性环境中，其羧基发生电离而带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。抗体分子在电场中从正极向负极移动。实验步骤制板打孔封底加样电泳3－4ml琼脂孔间距3mm约7ul切割火焰2－3次总电流＝4mA/cmx2.5cm(板宽)xN(板数）30分钟抗原抗体实验结果注意事项抗原抗体不能放反加样前须封底样品不能从孔内溢出电泳时电流大小须合适实验报告（交单页）原理方法结果