目录末页概述目录•目的要求一、单向琼脂扩散试验二、双向琼脂扩散试验三、火箭电泳四、对流免疫电泳五、免疫电泳目录末页1.掌握对流免疫实验原理、操作过程及应用。2.熟悉单向、双向琼脂扩散实验的原理、操作过程及应用。3.了解免疫电泳、火箭电泳实验的原理、操作过程及应用。目的要求目的要求目录末页可溶性抗原（如血清蛋白、外毒素等）与相应抗体结合，在适宜条件(比例/电解质/时间)下，形成肉眼可见的沉淀物的现象。实验二沉淀反应实验二沉淀反应（（PrecipitationtestPrecipitationtest））目录末页沉淀反应沉淀反应分类:琼脂扩散环状沉淀反应絮状沉淀反应免疫电泳沉淀物可溶性抗原相应抗体+比例/电解质/时间目录末页琼脂扩散实验琼脂扩散实验可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，在适当比例下形成沉淀线或沉淀环。分类分类::单向琼脂扩散实验:仅抗原或抗体扩散——定量双向琼脂扩散实验:抗原和抗体同时扩散——定性目录末页沉淀反应分类沉淀反应分类一、单向琼脂扩散一、单向琼脂扩散特点1.简单2.灵敏度较低约为：10－20μg3.1~2天才能看结果目录末页一、单向琼脂扩散试验【原理】将Ab混合于琼脂内，倾注于玻片上，凝固后打孔，将Ag标本加入孔内，经过一定的时间，在孔的周围出现AgAb复合物形成的沉淀环，环的大小与Ag含量和扩散时间相关。——定量试验，可检查血清中Ig和补体的含量。目录末页单向琼脂扩散单向琼脂扩散目录末页一、单向琼脂扩散试验AgAgAgAg琼脂中含抗体1:101:201:401:80Ag未知目录末页抗原浓度沉淀环直径平方用不同浓度的抗原制成标准曲线，则未知标本中的抗原含量可从标准曲线图中求出。目录末页目录末页一、单向琼脂扩散二、火箭电泳特点：1.需仪器2.灵敏度与单向扩散相仿3.需时间短、可定量沉淀反应分类沉淀反应分类目录末页二、火箭电泳二、火箭电泳目录末页一、单向琼脂扩散三、双向琼脂扩散二、火箭电泳用于样品成分分析抗原和抗体纯度分析沉淀反应分类沉淀反应分类目录末页【原理】抗原和抗体加到琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如两者相对应，浓度比例合适，则经一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰致密的白色沉淀线。三、双向琼脂扩散试验三、双向琼脂扩散试验目录末页三、双向琼脂扩散试验三、双向琼脂扩散试验目录末页一对相应抗原抗体形成一条沉淀线多对相应抗原抗体形成多条沉淀线方法：方法：倒琼脂→打孔→分别加入抗原抗体→孵育→观察结果双向琼脂扩散试验目录末页三、双向琼脂扩散试验三、双向琼脂扩散试验目录末页目录末页一、单向琼脂扩散四、对流免疫电泳三、双向琼脂扩散二、火箭电泳特点：1.需仪器2.灵敏度提高约为：10μg/ml3.1h能看结果沉淀反应分类沉淀反应分类目录末页四、对流免疫电泳四、对流免疫电泳【原理】在适宜缓冲液和电场条件下，抗原和相应抗体在琼脂凝胶中，由于电泳和电渗作用，抗原向正极移动，抗体向负极移动，两者相向移动，在两孔之间相遇，在比例合适处形成沉淀线。目录末页四、对流免疫电泳四、对流免疫电泳(一）实验材料1.试剂1.5%琼脂液，AFP诊断血清（含抗AFP抗体），AFP阳性血清、待检血清，巴比妥缓冲液。2.仪器及用具电泳仪、电泳槽、打孔器、微量滴管、纱布条、镊子。目录末页（1）制板（2）打孔（3）加样（4）电泳四、对流免疫电泳四、对流免疫电泳（二）方法目录末页方法：1.彻底融化1.5%琼脂液2.取约4ml琼脂液浇注在载玻片上凝固3.打4个孔，孔径3mm，孔距6mm4.在孔中加入相应样品5.电泳约1hAg1AbAg2Ab__++目录末页对流免疫电泳对流免疫电泳目录末页1.单向琼脂扩散3.双向琼脂扩散2.火箭电泳4.对流免疫电泳5.免疫电泳沉淀反应分类沉淀反应分类目录末页免疫电泳免疫电泳
