[珍藏版]质粒提取中的原理VIP免费

1． 溶 液 I—溶 菌 液 ： 溶 菌 酶 ： 它 是 糖 苷 水 解 酶 ， 能 水 解 菌 体 细 胞 壁 的 主 要 化 学 成 分 肽 聚 糖 中 的 β-1,4 糖 苷 键 ， 因 而 具有 溶 菌 的 作 用 。 当 溶 液 中 pH 小 于 8 时 ， 溶 菌 酶 作 用 受 到 抑 制 。 葡 萄 糖 ： 增 加 溶 液 的 粘 度 ， 维 持 渗 透 压 ， 防 止 DNA 受 机 械 剪 切 力 作 用 而 降 解 。 EDTA： （ 1） 螯 合 Mg2＋ 、Ca2＋ 等金属离子， 抑 制 脱氧核糖 核酸酶 对 DNA 的 降 解 作 用 （ DNase 作 用 时 需要 一定的 金属离子作 辅基） ;（ 2） EDTA 的 存在， 有 利于 溶 菌 酶 的 作 用 ， 因 为溶 菌 酶的 反应要 求有 较低的 离子强度 的 环境。 2． 溶 液 II－NaOH－SDS 液 ： NaOH： 核酸在 pH 大于 5， 小 于9 的 溶 液 中 ， 是 稳定的 。 但当 pH＞12 或 pH＜3 时 ， 就会引起双链之间氢键 的 解 离而 变性。 在溶 液 II 中 的 NaOH 浓度 为 0.2mo1／L， 加 抽提液 时 ， 该系统的pH 就高达 12.6， 因 而 促使染色体 DNA 与质粒 DNA 的 变性。 SDS： SDS 是 离子型表面活性剂。 它 主 要 功能 有 ： （ 1） 溶 解 细 胞 膜上的 脂质与蛋白， 因 而 溶 解膜蛋白而 破坏细 胞 膜。 （ 2） 解 聚 细 胞 中 的 核蛋白。 （ 3） SDS 能 与蛋白质结合 成 为 R-O-SO3-…R＋ -蛋白质的 复合 物， 使蛋白质变性而 沉淀下来。 但是 SDS 能 抑 制 核糖 核酸酶 的 作 用 ， 所以在以后的 提取过程中 ， 必须把它 去除干净， 防 止 在下一步操作 中 （ 用 RNase 去除 RNA 时 ） 受 到 干扰。 3. 溶 液 III--3mol／L NaAc（ pH4.8） 溶 液 ： NaAc 的 水 溶 液 呈碱性， 为了调节 pH 至 4.8， 必须加 入大量的 冰醋酸。 所以该溶 液 实际上是 NaAc-HAc 的 缓冲液 。 用pH4.8 的 NaAc 溶 液 是 为了把 pH12.6 的 抽提液 ， 调回 pH 至中 性， 使变性的 质粒 DNA 能 够复性， 并能 稳定存在。 而 高盐的 3mol／L NaAc 有 利于 变性的 大分 子染色体DNA、RNA 以及 SDS-蛋白复合 物凝聚 而 沉淀之。 前者是 ...