福建医科大学人工湖水体中——细菌总数及大肠菌群数的检测实验方案实验组员：陈秋香、陈志明、林玲、李淋、管修标一、 实验目的1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。2．了解水的平板菌落计数的原则。3.掌握测定水中大肠菌群数量的多管发酵法的原理、操作步骤及方法；4.了解水质评价的微生物学卫生标准，明白其应用的重要性。二、实验原理A．水中的细菌总数越多， 说明水中有机物的含量就越高，水体被污染的程度越重。水中细菌的种属繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中的细菌的总数实际上是一种近似值。肠道中的绝大多数腐生性和致病性的细菌，可在牛肉膏蛋白胨培养基上进行生长。因此应用平板菌落计数技术来测定水样中的细菌总数基本上能代表水样中细菌的数量。B. 总大肠菌群是以E.coli 为代表的杆状、无芽胞、需氧或兼性厌氧、革兰氏阴性，经37℃、 24～48h 培养，发酵乳糖产酸产CO2 可区别于其他肠道菌，易于测定的一类细菌。 大肠菌群主要包括埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属和柠檬酸杆菌属。这类菌是温血动物肠道中的正常菌群， 常随动物的粪便污染水源， 一个成年人每天排出的粪便中含有（ 5-100）×1010 个这类细菌，并且它们与水中存在的肠道病原菌呈正相关性， 而病原菌在水中的浓度很低，测定手续繁琐， 工作人员还有被感染传播的危险。 因此，总大肠菌群是一个合适的指示菌，能指示出病原菌在水中的存在，其数量大于或等于病原菌的数量，并且比病原菌容易检出， 所以检测水的细菌学卫生标准，通常检测总大肠菌群。三、实验器材及试剂1.菌落总数恒温培养箱、高压蒸气锅、电子天平、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；灭菌的玻璃塞瓶1 个，三角烧瓶 /烧杯 4 个，灭菌培养皿9 个，1ml移液管 6 支、10ml 2 支、试管 3 支， PH 试纸、玻璃棒、记号笔1支,100ml 量筒，滴管 2 支。2.大肠菌群仪器及用具：高压蒸气锅、恒温培养箱、显微镜（载玻片一盒、擦镜纸、双层瓶含香柏油和二甲苯）打火机、酒精灯、接种环、无菌1ml吸管 8 支、10ml 4 支，发酵用试管10 支、杜氏小管 10 个，烧杯 /蒸馏瓶 5 个， 100ml 量筒、滴管若干， PH 试纸、玻璃棒、电子台秤。培养基：乳糖蛋白胨半固体培养基， 三倍浓乳糖蛋白胨培养液，伊红美蓝培养基，革兰染色剂，生理...
