单克隆抗体技术及其应用VIP免费

FishDiseaseResearchCenter单克隆抗体技术及其应用报告人：杨金先FishDiseaseResearchCenter1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。单克隆抗体（单克隆抗体（monoclonalantibodymonoclonalantibody））：针对预定抗原的同一抗原决定簇的，高度同质的，且能保证无限量供应的抗体。单克隆抗体技术的理论依据单克隆抗体技术的理论依据：抗体的多样性、克隆选择学说、抗体基因的重排理论、抗体结构与生物合成机制。单克隆抗体技术简介FishDiseaseResearchCenterFishDiseaseResearchCenter骨髓瘤细胞（SP2/O-Ag14）：单克隆技术的原理丧失合成次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（hypoxanthineguanosinephosphoribosyltransferase，HGPRT－）无法在HAT选择培养剂中生长能无限地快速增殖既不合成轻链又不合成重链小鼠脾细胞（B-Cell）：合成和分泌特异性抗体无法进行体外长期培养脾细胞－SP2/O融合细胞：HGPRT＋，能在HAT选择培养剂中生长能无限地快速增殖合成和分泌特异性抗体HATFishDiseaseResearchCenter单克隆抗体制备过程（示意图）克隆形成单克隆细胞→扩大培养，制备抗体、液氮冻存SP2/OB细胞细胞融合有限稀释法进行单克隆细胞融合的方法：1、仙台病毒2、PEG/DMSO3、电融合FishDiseaseResearchCenter严格进行无菌操作，防止污染（细菌、霉菌、支原体、细胞）根据实验的目标及时进行细胞的检测与筛选，（ELISA、IFA、凝集、中和，……）对筛选得到的阳性细胞克隆进行早期单克隆（有限稀释法）在单克隆细胞建株过程中不定期验证检测防止单克隆细胞过度生长——老化死亡单克隆抗体制备过程的注意事项FishDiseaseResearchCenter单抗Monoclonalantibody由杂交瘤细胞系产生的，针对同一抗原决定簇的抗体——高度均质。由同一个B细胞克隆产生的同异质的抗体组成，是针对抗原的单一决定簇抗体。单抗纯度高，专一性强、重复性好。无披次差异。易于标准化。能保证无限量供应。单克隆抗体与免疫血清的比较免疫血清又称多克隆抗体（polyclonalantibody），简称多抗。由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成，是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分——特异性差。不同批次的抗体制剂质量差异很大。难以工业化批量制备。FishDiseaseResearchCenter单克隆抗体技术的应用22、治疗试剂、治疗试剂病毒等微生物的中和抗体抗毒素—蛇毒、破伤风毒素，等被动免疫治疗制剂“生物导弹”••••••••••••22、治疗试剂、治疗试剂病毒等微生物的中和抗体抗毒素—蛇毒、破伤风毒素，等被动免疫治疗制剂“生物导弹”••••••••••••33、分子生物学研究工具、分子生物学研究工具蛋白质等生物活性分子的纯化；蛋白质等生物活性分子的纯化；细胞生物学细胞生物学————组织定位；组织定位；分子病毒学分子病毒学————结构分析；结构分析；特定生物分子的功能研究；特定生物分子的功能研究；33、分子生物学研究工具、分子生物学研究工具蛋白质等生物活性分子的纯化；蛋白质等生物活性分子的纯化；细胞生物学细胞生物学————组织定位；组织定位；分子病毒学分子病毒学————结构分析；结构分析；特定生物分子的功能研究；特定生物分子的功能研究；11、免疫学快速诊断试剂（抗体）、免疫学快速诊断试剂（抗体）细菌细菌病毒病毒肿瘤因子肿瘤因子特定蛋白特定蛋白农残检测农残检测••••••••••••11、免疫学快速诊断试剂（抗体）、免疫学快速诊断试剂（抗体）细菌细菌病毒病毒肿瘤因子肿瘤因子特定蛋白特定蛋白农残检测农残检测••••••••••••诊断技术方法：ELISA（间接法、夹心法、竞争法）免疫荧光法胶体金放射免疫法••••••••••••FishDiseaseResearchCenterFishDiseaseResearchCenter我们实验室已经制备的单克隆抗体鱼类Ig单抗欧洲鳗血清IgM欧洲鳗粘膜Ig石斑鱼IgM大黄鱼IgM鳜鱼IgM鮰鱼IgM病原微生物嗜水...