多聚酶链式反应扩增DNA片段VIP免费

复习提问：1、固定化技术的方法有哪些？2、酶和细胞适合用哪种方法？为什么？3、制备固定化酵母细胞过程中最重要的一步？4、海藻酸钠浓度过高、过低带来的影响？5、为什么要将海藻酸钠溶液冷却至室温再加入已活化的酵母细胞？6、凝胶珠成分？7、如何判断固定化酵母细胞已经促进发酵？8、酶、固定化酶和固定化细胞的优缺点？专题5DNA和蛋白质技术课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段在刑事侦破案件中常需要对样品DNA进行分析，多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。一、PCR的原理DNA母链解旋酶DNA聚合酶1．生物体内DNA复制的条件(1)原料____________________。(2)模板：解旋后的每一条____________。(3)酶：打开DNA双链的________和合成DNA单链的____________。4种脱氧核苷酸2．PCR扩增的原理(1)原理：①DNA变性：在__________的温度范围内，DNA的_______结构将解体双链分开，这个过程称为变性。②DNA复性：当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新____________，这个过程称为复性。双链DNA单链DNA80～100℃双螺旋结合成双链80~100℃缓慢冷却3′5′3′③DNA合成：DNA聚合酶从引物___端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的___端向___端延伸。(2)DNA复制为什么需要引物？(引物的作用？）引物是一小段DNA或RNA。通常将DNA的羟基末端称为3′端，而磷酸基团的末端称为5′端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。(3)条件：①模板：解旋后的每一条___________。②引物：能分别与____________结合的两种引物。③原料：____________________。④酶：_____DNA聚合酶（耐高温的TaqDNA聚合酶）。⑤其他条件：需要稳定的__________和能自动调节温度的温控设备。DNA母链两条模板链4种脱氧核苷酸耐热的缓冲溶液3.PCR的反应过程:（三十多次循环）①变性:当温度上升到___℃以上时,双链DNA解旋,氢键断裂,变为单链。②复性:当温度下降到___℃左右,两种引物通过_____________与两条单链DNA结合。③延伸:当温度上升到___℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸(A,T,G,C)在__________的作用下,根据_______________合成新的DNA链,DNA子链延伸。9050碱基互补配对72DNA聚合酶碱基互补配对原则PCR的反应过程(如图):4、思考：PCR反应过程中的温度控制为什么要先高温后低温然后再适当升温?PCR过程中先高温解旋,后低温使引物与模板结合,然后再适当升温尽量达到TaqDNA聚合酶的最适温度,加快反应速度。二、PCR的实验操作温度恒温0.51．实验用具(1)PCR仪：该仪器能自动调控______，实现DNA的扩增。如果没有PCR仪，可用3个_____水浴锅代替，操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。(2)微量离心管：总容积为____mL，实际上是进行PCR反应的场所。(3)微量移液器：用于向微量离心管中转移PCR配方中的液体，每吸取一种试剂后,移液器上的枪头都必须更换。微量移液器PCR仪2.实验步骤:准备:按照PCR反应需要的物质和条件,将需要的试剂和仪器准备好移液:用_________按照配方在微量离心管中依次加入各试剂混合:盖严离心管口的盖子,用手指轻弹管的侧壁，使反应液混合均匀离心:将离心管放在离心机上,离心约10s,使反应液集中在离心管底部反应:将离心管放入______中进行反应260nm50×(260nm的读数)3．DNA含量的测定(1)原理：利用DNA在________的紫外线波段有一强烈的吸收峰，吸收曲线的高度与被测物质的含量呈正比。(2)计算公式：DNA含量(μg/mL)＝_________________×稀释倍数。4．操作提示：①为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。②PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在-20℃储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。③每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。1、PCR过程中,一个DNA分子会扩增成多少个?经过30次循环呢？2个；230个DNA分子；呈指数扩增。公式：2n个DNA分子（n代表循环次数）请绘制表示PCR反映...