动物细胞培养基础知识 一、细胞培养的概念： 细胞培养是用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜条件下使细胞生长繁殖，并保留一定的结构和功能特性。 细胞培养是 20 世纪初（1907 年，Harrson）才建立的一种研究动物细胞行为的方法。由于细胞培养在医学研究中的应用，如抗病毒疫苗的生产等，现已经逐渐发展成为一门精细技术。许多细胞株、细胞系的培育成功，尤其是以人的肿瘤组织为材料建立的各种细胞系，如Hela 细胞系（Gey，1952），可用来进行一系列研究，更加促进了组织培养技术的发展。 二、动物细胞培养的特点 动物细胞虽可像微生物细胞一样, 在人工控制条件的生物反应器中进行大规模培养, 但其细胞结构和培养特性与微生物细胞相比, 有显著差别 :①动物细胞比微生物细胞大得多, 无细胞壁, 机械强度低, 对剪切力敏感, 适应环境能力差; ②倍增时间长, 生长缓慢, 易受微生物污染, 培养时须用抗生素; ③培养过程需氧量少④培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在; ⑤培养细胞一般繁殖 50 代即退化死亡; ⑥代谢产物具有生物活性, 生产成本高, 但附加值也高。 微生物和动物细胞培养的差别 微生物（细菌） 动物细胞 细胞直径（µm） 1～10 10～100 营养谱 比较广泛的基质 要求严格 倍增时间（h） 0.5～2 12～60 pH 控制 ±0.5 ±0.05 温度控制（℃） ±1 ±0.25 三、细胞培养所需的条件： 1 培养液 以往多用天然培养液，现多用合成培养液。合成培养液有多种，如 Eagle 氏液、RPMI-1640、MEM 和 199 等，各有其特点和适用范围。Eagle 液主要成分为 13 种必需氨基酸、8 种维生素、糖和无机盐等成分 RPMI-1640、199 乳汉液还含有其它氨基酸。不同培养液适用于不同细胞，乳汉液多用于鸡胚成纤维细胞培养；Eagle 液主要适用于各种二倍体细胞，是最常用的细胞培养液，RPMI-1640、MEM 液主要用于传代细胞的培养。 可根据培养细胞的特殊要求进行添加： 抗生素:常用为青霉素（每毫升培养液 50~100 单位）和链霉素（每毫升培养液 50~100 微克）。 有机补充物，如丙酮酸钠， 谷胺酰氨等。 促细胞分裂因子，如生长因子类的FGF(成纤维细胞生长因子)，EGF(表皮生长因子)。 贴壁和铺展因子，如胶原蛋白，纤粘蛋白等。 2 血清 在细胞培养液中必须添加一定量的血清方能获得成功。血清中除了含有细胞生长的部分氨基酸外，还有促进细胞生长和贴壁的成分。...
