大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天： 1
将适合菌株（如 XL1-Blue, DH5α）置于 LB 或其他营养丰富的培养基上，在 37°C 下过夜培养 2
高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用 3
准备几瓶灭菌水（总量约 1
5 升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天： 4
2-1ml 过夜培养物至装有 500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的 1-2 升挡板摇瓶中 5
37°C 下剧烈振荡培养 2-6 小时 6
定时监控 O
600 值（培养 1 小时后每半小时测定一次） 7
600 值达到 0
0 时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少 15 分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时） 8
细胞在 4°C 5000g 下离心 15 分钟，弃上清液（如需要，沉淀可在 4°C 的 10%甘油中保存一两天） 9
用灭菌的冰水重悬浮细胞
先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几毫升），然后加水稀释至离心管的 2/3 体积
照上面步骤重复离心，小心弃去上清液 11
照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞 12
离心，弃上清液 13
用 20ml 灭菌的、冰冷后的 10%甘油重悬浮细胞 14
照上面步骤离心，小心弃去上清液（沉淀可能会很松散） 15
用 10%甘油重悬浮细胞至最终体积为 2-3ml 16
将细胞按 150μl等份装入微量离心管，于-80°C 保存 转化方法: 1
在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μl DNA ，冰上培育约 5 分钟 2
添加1-3μl DNA ，冰上培育约 5 分钟 3
转移 DNA/细胞混合物至冷却后的 2mm 电穿孔容器（无泡）中 4
加载 P1000，准备好 300μl LB 或 2xYT 5
对电穿孔容器进行脉冲（200
