凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒VIP免费

无凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)（BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本）使用说明书一、TUNEL制品说明凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdTEnzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘－OH末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。本试剂盒特点●操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有ProteinaseK和DAB。●高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。●高特异性：能特异性染色凋亡细胞。●快速操作：整体操作约需3小时。●用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。●方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。●高正确性：有阳性对照片的制备方法，可以确认试剂盒的有效性使用注意事项1．使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。2．因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。无3．为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。4．TdT酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。5.为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。6.固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜，以改善细胞的渗透性。7.使用PBS清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。8.进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。9.DAB为固体粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10mg/ml）后，按说明书显色使用。二、TUNEL试剂盒组分组份Cat:KGA70220assaysCat:KGA70350assaysCat:KGA704100assays储存条件EquilibrationBuffer1.0mL2.5mL5.0mL-20℃Biotin-11-dUTP20μL50μL100μL-20℃TdTEnzyme80μL200μL400μL-20℃50×ProteinaseK40μL100μL200μL-20℃Streptavidin-HRP10μL25μL50μL4℃避光DAB2mg5mg10mg-20℃试剂盒以外自备仪器和试剂光学显微镜、37℃孵箱、微量移液器、染色湿盒、盖玻片、载玻片、染色缸。二甲苯、多聚甲醛、PBS、H2O2、TritonX-100、柠檬酸钠、复染染液：苏木素或甲基绿等。三、操作流程概览细胞涂片、贴壁细胞爬片等细胞样本固定样本通透性的促进TdT酶的作用下Biotin-dUTP与样本DNAD的标记反应加入Streptavidin-HRP及底物DAB的显色反应光学显微镜观察无四、检测样本的预处理TUNEL检测时样本的预处理是试验的关键所在，本说明书推荐的条件仅为普遍情况，用户需根椐自已的样本材料及首次试验结果来调整各个条件（参照Page9），如处理时间、处理浓度等，来优化出适合自身样本的试验条件，从而做出客观的试验结果。1．细胞样本的准备无操作注意事项：1.为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。2.使用PBS清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。3.进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。4.固定液、PBS、封闭液、通透液、染色缸需用户自备，请按上述方法配制。五、标记和显色反应无操作注意事项：1.进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。2.PBS清洗后，为了各种反应的有效进行，请尽量除去PBS溶液后再进行下一步反应3.在载玻片上的样本上加上实验用反应液后，请盖上盖玻片或保鲜膜，或在湿盒中进行，这样可以使反应液均匀分布于样本整体，又可以防止反应液干燥造成实验失败。4.TdT酶反应液即用即配，短暂于冰上保存。不宜长期保存，长期保存会导酶活性的失活。5.如果20×DAB溶液颜色变深成为紫色，则不可使用，需重新配制。无6.苏木素复染：将切片放入苏木素染液，染色30s-10min（根据样本做适当调整），蒸馏水冲洗干净后放入盐酸甲醇溶液中5s，立...