层析分离方法

层析分离方法 概 述 ■ 层析法――是一种使不同分子相互分离的过程，当一混合样品被导入一固定相的支持体中，而另一流体(移动相)通过时，由于样品各组分与固定相和移动相相互作用的大小不同，使各组分通过固定相支持体的速率不同而得分离。 层析法的特点：能分离一系列结构较为相似的成分，以达到一般分离方法难以达到的目的。 ■ 层析常见种类及用途: a.柱层析――分离量较大，主要用于分离制备； b.薄层层析――主要用于分析鉴定,也可用于半微量制备。 c.纸层析――主要用于分析鉴定，也可用于半微量制备。 ■ 层析法按分离原理大体上又可以分为 (1) 吸附层析(利用吸附能力的差别进行分离)，常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等； (2) 分配层析(利用在二种不互溶的溶剂中分配比不同进行分离)，常用的支持剂为硅胶、硅藻土、纤维粉等，反相硅胶(键合硅胶)、液滴逆流层析则是分配层析与逆流分溶的发展； (3) 离子交换层析(利用离子解离强度不同进行分离)，常用的离子交换树脂有强酸性(磺酸型)、强碱性(季胺型)、弱酸性(羧酸型)、弱碱性(三级胺型)； (4) 电泳(利用电流通过时，离子趋电性不同进行分离)，常用的有纸电泳、琼脂电泳、凝胶电泳。 (5) 其他有气体层析、凝胶层析、亲和层析等， ■ 层析方法的选择： (1) 非极性的成分常选择氧化铝或硅胶吸附层析； (2) 极性较大则采用分配层析或弱吸附剂吸附层析； (3) 酸性、两性成分可用离子交换层析，有时也可用吸附层析及分配层析。 ■ 各类化合物适宜的层析方法： a. 一般生物碱的分离可用硅胶或氧化铝层析，对极性较高的生物碱也可用分配层析，而对季胺型水溶性生物碱也可用分配层析或离子交换层析。 b. 甙类的层析分离往往决定于甙元的性质，如皂甙、强心甙，一般可用分配层析或硅胶吸附层析。 c. 芳香油、甾体、萜类(结合成甙除外)包括萜类内酯，往往首选氧化铝及硅胶层析，若在氧化铝柱上有次级反应，则宜用硅胶吸附层析。 d. 黄酮体、单宁等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附层析。 e. 有机酸、氨基酸一般可选用离子交换层析，有时也用分配层析，有些氨基酸也可用活性炭吸附层析。 f. 多肽、多糖等大分子化合物，常用凝胶层析、亲和层析、反相硅胶（键合硅胶）。 第一部分 柱层析 第一章 硅胶层析 一、 层析用硅胶 层析用硅胶一般以SiO2·xH2O 表示，系多孔性的硅氧环 Siloxane(a)交链结构，由于其骨架 SiOSi(a) SiOH(b) 表面具有很多硅...