1 细胞培养工作流程一、Vero 细胞复苏流程1、准备工作地点检查：检查台面、地面是否洁净，确认无不相关物品。设施检查：确认空调、传递窗工作状态完好。层流罩准备：开启层流罩，观察其运行是否正常，用消毒剂将台面、墙面、地面、保护帘及层流罩内设备进行清洁消毒。并运行30 分钟后开始生产操作。操作工具和试剂检查：检查本次操作所用灭菌物品外包装是否严密，是否在效期内。检查本次操作所用溶液/ 试剂瓶内是否有异物，瓶表面是否有裂纹，瓶塞是否松动，溶液名称、批号、数量、有效期是否符合要求。合格后用消毒剂擦拭外表面后拿入层流罩。复苏、换液用液体：MEM液、新生牛血清、3%谷氨酰胺溶液、庆大霉素、%NaHCO3溶液。复苏用水准备：（1）融化种子用溶液：按1L/1 支种子准备39±1℃含 %新洁尔灭溶液。（2）百级内消毒种子用水：1L/1 支种子准备± 1℃含 %新洁尔灭溶液。操作人员进入层流罩：穿一层无菌连体服并戴无菌手套，静止5 分钟后方可操作。溶液使用前处理：辅助人员用止血钳夹酒精棉球点燃后消毒瓶塞外表面，旋转1 周，操作人员将翻塞翻开，再用点燃的酒精棉球消毒瓶口及瓶塞。2、配液2 配方复苏液MEM生长液名称加入量（ml）含量控制范围加入量（ ml）含量控制范围MEM培养基溶液100/300/新生牛血清109%～10%15%～%3%谷氨酰胺溶液1%～1%3%～1%庆大霉素%～%%～%%NaHCO3%～%%～2%辅助人员将配制所需的液体按顺序打开后放至盐水瓶架上，操作人员按配方加量用吸管依次吸取新生牛血清等溶液至MEM液中，每吸完一种液后辅助人员应立即用无菌翻塞将其盖紧，在其瓶身用记号笔注明用量、日期等。 复苏液及生长液配完后辅助人员立即用无菌翻塞将其盖紧，充分混匀待用。辅助人员打开混匀后的复苏液，放置盐水瓶架上。操作人员将培养瓶（T175）盖打开，倾斜或直立放置酒精灯附近，将复苏液用吸管吸取或直接倒入其中（加量：～ ml/cm2），拧紧瓶盖并放在恒温室待用。3、种子支领依据种子库管理规定进行支领，依据生产指令按数量支领。本操作规格按复苏1 支细胞种子到 1 个 T75 cm2瓶规定各项操作。若支领数量变化培养瓶面积按比例调整，后续操作各项用量按比例调整。4、种子速溶种子库管理员从细胞库刚取出细胞种子时，在液氮罐颈部停留几秒，核对所支领的种子标签内容与细胞种子申领单上的内容是否一致。核对无误后，迅速全部浸入39±1℃含 %新洁尔灭溶液（ 1000ml / 支种子），顺时针不停摇动直至融化，将每次的速融时间...
