异种动物ig免疫白兔实验设计

异种动物ig 免疫白兔实验设计 1. 器材： 剪刀（剪兔毛用）一把、弯头眼科手术镊子（游离血管用）一把、直头眼科手术剪（剪血管用）一把，手术刀架，手术刀片，注射器(1ml、10ml，25ml)附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿（直径 18cm）、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布等。 2. 试剂： 生理盐水(或 PBS)， 弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant, FCA） Sigma F-5881， 弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant, FIA) Sigma F-5506， 二甲苯，酒精棉，脱脂棉，2% NaN3 3. 兔子的选择： 兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。 4. Pre-bleeding： 抗原注射以前需要收集一些正常血清，已备检测抗体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定，大概需要四天左右时间，可以进行耳动脉取血。取血量约 5ml 足矣。 免疫用的抗原必须纯化，否则影响抗体的质量。抗原经 FCA 或 FIA 充分乳化后才能注射。将抗原液与佐剂等比例混合后，置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化，乳化过程比较费时、费力，但若乳化不充分，会影响免疫的效果，振荡后，1000rpm 离心一分钟，如水相和油相不分层即可注射。首次免疫用FCA，以后都用FIA。 免疫方法可采用背部多点注射法。即于家兔脊柱两旁选 4-6 点皮下注射，每点注 0.1ml，间隔 2 周后再于上述部位选不同点注射（不要选择临近位点，否则溃疡愈合不好）。每次免疫的抗原量约 100μ g。免疫次数在四五次即可，抗原用量大可以减少次数。 免疫一周后，可以耳动脉取血检测抗体效价。因为起初几次免疫产生的抗体的效价比较低，头两次取血，够检测用即可。在三次免疫后，可以获得较高效价的抗体，每次取血量可以在 40ml，不要取太多，否则会造成兔子贫血。 最后一次取血可以采用颈动脉放血，具体操作如下： a.家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤； b.沿颈部中线用手术刀切开皮肤约 10cm，分离皮下结缔组织，直至暴露出气管两侧的胸锁 乳突肌（小心操作，如碰到小血管出血，可用止血钳止血） c.用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离，剥离神经和结缔组织； d.于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住； e.用小拇指垫在血管下，...