植物生理生化指标测定

小黑豆相关生理指标测定1.表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积鲜重:取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6 个重复。株高:取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测 6个重复。主根长:取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测 6个重复。叶面积:取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长,测叶片最窄处长度作为叶的宽,叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6 个重复。2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA 和 H2O2 含量测定样品处理:取 0.5g 样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl（pH7.4 抽提,将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中，于 4°C,12000rpm 离心 15min,取上清，保存在-20°C 下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA、可溶性糖和 H2O2 含量测定。总蛋白测定（Bradford 法:样品反应体系（800ulH20+200ulBradford+5ul 样品，空白对照为（800ulH20+200ulBradford。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224（Y代表蛋白含量,X 代表 OD595，计算得出蛋白含量。可溶性糖测定:样品反应体系（1ml 蔥酮+180ulddH2O+20ul 样品提取液;空白对照（1ml 蔥酮+180ulddH2O，测定 OD625 后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204（Y代表 OD625,X 代表可溶性糖含量（ug蔥酮配方:称取 lOOmg 蔥酮溶于 100ml 稀硫酸(76m1 浓硫酸+30mlH2O.注意：浓硫酸加入水中时,一点一点递加,小心溅出受伤。丙二醛(MDA 测定:在酸性和高温条件下,丙二醛可与硫代巴比妥(TBA 反应生成红棕色的 3,5,5-三甲基恶唑 2,4-二酮,在 532nm 处有最大吸收波长,但该反应受可溶性糖的极大干扰,糖与 TBA 的反应产物在 532nm 处也有吸收,但其最大吸收波长在450nm 处。采用双组分分光光度法,可计算出 MDA 含量。MDA 的计算公式为:MDA(umol/L=6.450D532-0.560D450.反应体系为:400ul0.6%TBA+350ulH2O+50ul 样品，80°C 水浴 10min 后,测OD532 和 OD450。对照用 Tris-HCl.0.6%TBA 配方:称取硫代巴比妥 0.6g，溶于少量 1MNaOH 中，待其完全溶解后用 10%TCA(称取 10gTCA 三氯乙酸，溶于 100ml 蒸馏水中,待其溶解即可定容至100ml。H2O2 测定(二甲酚橙法:样品反应体系(82ul 溶液 A+820ul 溶液B(A:B=1:10+150ul 样品提取液，30C 水浴 3...