第 1 页 共 4 页实验九水中总大肠菌群的测定—多管发酵法一．实验目的和要求1．掌握多管发酵法测定水中大肠菌群的技术。2．预习第六章细菌学检验法的关内容。二．原理总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。试验结果以最可能数（most probable number），简称 MPN 表示。三．仪器(1)高压蒸气灭菌器。(2)恒温培养箱、冰箱。(3)生物显微镜、载玻片。(4)酒精灯、镍铬丝接种棒。(5)培养皿（直径 100mm）、试管（ 5×150mm），吸管（ 1、5、10mL）、烧杯（200、500、2000mL）、锥形瓶（ 500、1000mL）、采样瓶。四．培养基及染色剂的制备1．乳糖蛋白胨培养液：将10g 蛋白胨、 3g 牛肉膏、 5g 乳糖和 5g 氯化钠加热溶解于 1000mL 蒸馏水中，调节溶液pH 为 7.2～7.4，再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL，充分混匀，分装于试管中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。2．三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液： 按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外，各组份用量增加至三倍。3．品红亚硫酸钠培养基：①贮备培养基的制备：于2000mL 烧杯中，先将 20～30g 琼脂加到 900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入3.5g 磷酸氢二钾及 10g 蛋白胨，混匀，使其溶解，再用蒸馏水补充到1000mL，调节溶液 pH 为 7.2～7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入 10g 乳糖，混匀，定量分装于250mL 或 500mL 锥形瓶内，置于高压灭菌器中，在121℃灭菌 15min，贮存于冷暗处备用。②平皿培养基的制备： 将上法制备的贮备培养基加热融化。根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌试管中；再按比例称取无水亚硫酸钠，置于另一灭菌试管内， 加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（灭菌）。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色再褪至淡红色为止（不宜加多）。将此混合液全部加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡）。立即将此培养基适量（约15mL）倾入已灭菌的平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用，但保存时间不宜超过两周。 如培养基已由淡红色变成深红色， 则不能再用。4．伊红美培养基：①贮备培养基的制备：于2000mL 烧杯中，先将 20～30g 琼脂...
