试验九脂肪酸β氧化

百度文库- 让每个人平等地提升自我11 实验九脂肪酸β-氧化目的要求：（1）了解脂肪酸的β-氧化作用。(2) 掌握测定β-氧化作用的方法和原理。实验原理 : 在肝脏中，脂肪酸经β-氧化作用生成乙酰辅酶A 。2 分子乙酰辅酶A 可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式如下：2NaOH +I 2 ─→ NaOI +NaI +H 2O CH3COCH 3 +3NaOI ─→ CHI 3（碘仿） +CH 3COONa +2NaOH 剩余的碘，可以用标准硫代硫酸钠滴定。NaOI +NaI +2HCl ─→ I 2 +2NaCl +2H 2O I2 +2Na2S2O3 ─→ Na2S4O6 +2NaI 根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。试剂和器材一、试剂%淀粉溶液； %氯化钠溶液；15%三氯乙酸溶液；10%氢氧化钠溶液。10％盐酸溶液：浓盐酸一般浓度35%~37%，取浓盐酸mL 定容到 1000 mL 。L 丁酸溶液：取5 mL 丁酸溶于 100 L 氢氧化钠溶液中。L 碘溶液：称取12.7g 碘和约 25g 碘化钾溶于水中，稀释到1000 mL ，混匀，用标准L硫代硫酸钠溶液标定。标准 L 硫代硫酸钠溶液：临用时将已标定的L 硫代硫酸钠溶液稀释成L。1/15mol/L 磷酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液与1/15mol/L磷酸二氢钠溶液混合。二、材料新鲜猪肝。百度文库- 让每个人平等地提升自我22 三、器材锥形瓶 50mL （ 2）; 移液管 5mL（ 5），2mL（ 45）；微量滴定管5mL（ 1）;漏斗；恒温水浴。操作方法一、肝糜的制备称取肝组织5g 置于研钵中。加少量%氯化钠溶液，研磨成细浆。再加入%氯化钠溶液至总体积为10mL 。二、β -氧化作用取 2 个 50mL 锥形瓶， 各加入 3mL 1/15mol/L 磷酸盐缓冲液。 向其中一个锥形瓶中加入2mL 正丁酸，另一个锥形瓶作为对照，不加正丁酸。然后各加入2mL 肝组织糜。混匀，置于 37℃恒温水浴中保温。二、沉淀蛋白质保温 1 小时后，取出锥形瓶，各加入3mL15% 三氯乙酸溶液，在对照瓶内追加2mL 正丁酸，混匀，静置15 分钟后过滤。将滤液分别收集在两个试管中。三、酮体的测定吸取 2 种滤液各2mL 分别放入另两个锥形瓶中，再各加L 碘溶液和 3mL10% 氢氧化钠溶液。摇匀后，静置10 分钟。加入3mL10% 盐酸溶液中和。然后用L 标准硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘。 滴定至浅黄色时，加...