实验一还原糖和总糖的测定姓名：李凯学号： 5603115053 一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量 (还原糖以葡萄糖含量计 )。还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基 -5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在 540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。三、实验材料和试剂1、实验材料面粉2、实验试剂① 1mg/ml 葡萄糖标准液② 3,5-二硝基水杨酸 (DNS)试剂③ 碘-碘化钾溶液：④ 酚酞指示剂：⑤ 6M HCl和 6M NaOH 四 、 实验器材具塞玻璃刻度试管， 50ml 离心管，100ml 烧杯，100ml三角瓶， 100ml 容量瓶，移液管： 1ml；2ml；10ml，恒温水浴锅，离心机，天平，分光光度计。五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取 7 支具塞刻度试管编号，按表1 分别加入浓度为 1mg/ml 的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min 取出，冷却至室温，用蒸馏水补足至10ml，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。调波长540nm，用 0 号管调零点，分别测出1~6 号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量(mg)为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。2、样品中还原糖和总糖的测定① 还原糖的提取准确称取 2.00g食用面粉，放入 100ml烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后补足至50ml 蒸馏水，搅匀，置 50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。，将浸出液用塞棉花的长颈漏斗过滤，沉淀可用20ml蒸馏水洗一次，将过滤的溶液收集在100ml 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。② 总糖的水解和提取准确称取 1.00g食用面粉，放入 100ml 三角瓶中，加 15ml 蒸...
